microRNA-184在精子发生中的作用及分子机制

小RNA分子在精子发生过程中所发挥的转录后调控作用正日益受到研究者们的关注。MicroRNAs是一种在生物的生殖、发育、衰老及死亡过程中发挥重要作用的小RNA分子。研究表明，microRNA-184（miR-184）是主要表达于睾丸与脑组织中的一种microRNA，且在睾丸中的表达量远高于脑组织，但miR-184与哺乳动物精子发生的关系目前尚不清楚。本课题拟探讨miR-184在精子发生中的作用及分子机制。首先检测体外培养生精细胞中过表达或抑制表达miR-184后其生物学性状的改变，以及观察经睾丸输出小管注射miR-184或其抑制剂anti-miR-184后对精子发生的影响来探讨miR-184在精子发生中的作用；然后通过检测miR-184的靶基因来探讨miR-184调节精子发生的分子机制。为阐明miR-184在精子发生中的作用提供实验依据，并可能为临床上不育的诊疗带来新思路。

小RNA分子在精子发生过程中所发挥的转录后调控作用正日益受到研究者们的关注。MicroRNAs是一种在生物的生殖、发育、衰老及死亡过程中发挥重要作用的小RNA分子。研究表明，microRNA-184（miR-184）是主要表达于睾丸与脑组织中的一种microRNA，且在睾丸中的表达量远高于脑组织，但miR-184与哺乳动物精子发生的关系目前尚不清楚。本课题拟探讨miR-184在精子发生中的作用及分子机制。首先采用定量PCR和原位杂交方法检测miR-184在不同年龄小鼠睾丸中的表达水平及定位，结果表明miR-184在睾丸中的表达水平具有年龄变化特点，且miR-184定位于睾丸中从精原细胞到圆形精子细胞的所有生精细胞中。继而我们采用在生殖细胞系GC-1spg中过表达miR-184的方法，体外研究miR-184的生物学功能。结果表明miR-184促进GC-1spg细胞的增殖。进一步，我们通过生物信息学预测、双荧光素酶报告基因检测以及Western-blot的方法验证了miR-184的靶基因。报告基因检测发现miR-184通过互补结合Ncor2 mRNA 3'-非翻译区下调其表达，Western-blot检测发现过表达miR-184可下调内源性NCOR2蛋白的表达，说明Ncor2是miR-184的靶基因。最后，我们用定量PCR法结合Western-blot方法证明miR-184是通过抑制Ncor2 mRNA的翻译而不是通过降解Ncor2 mRNA来发挥转录后调控作用。简而言之，该项目确定了miR-184在睾丸中的特异表达模式、体外验证了其功能、鉴定了miR-184的一个靶基因。这些结果提示，miR-184在精子发生中发挥作用。