多不饱和脂肪酸在耐药结核杆菌自噬机制中作用研究

Tuberculosis is a serious threat to human health. The risk of drug-resistant tuberculosis has become increasingly prominent.It is important to explore new ways to control drug-resistant tuberculosis(DRTB). Early studies have found that nutritional factors have a significant impact on the incidence and prognosis of tuberculosis, but data of population study is rare. In recent years, studies on the role of polyunsaturated fatty acids may play an important role, but it has not yet been elucidated. This project intends to investigate the dietary questionnaire and anthropometric and serum levels of polyunsaturated fatty acids in the detection by DRTB patients-based case control study, combined with in vitro cell model and animal model cultivation and mathematical model, bacterial counts, by laser scanning confocal microscope to detect the number of Mycobacterium tuberculosis, electron microscopy and molecular biology technology and phagosome the degree of maturity (Beclin 1, LC-3), to reveal the polyunsaturated fatty acids in the relationship between autophagy in control of tuberculosis infection, providing new evidences for the prevention and treatment of drug-resistant tuberculosis.

结核病严重威胁人类健康，耐药结核病的危害日益凸显。早期研究发现营养因素对结核病发病与预后都有显著影响，但机制不明。近年来有关自噬作用与脂代谢的研究提示多不饱和脂肪酸可能在自噬机制中起重要作用，但缺乏人群研究资料。本项目拟通过基于耐药结核病患者人群的病例对照研究，采用膳食问卷调查和体格测量及血清中不饱和脂肪酸检测，同时结合体外培养细胞模型和动物模型，通过细菌计数、激光扫描共聚焦显微镜、电镜和分子生物学等技术检测结核菌的数量和吞噬体的成熟程度（Beclin 1，LC-3等指标），探讨多不饱和脂肪酸对自噬作用的影响，揭示多不饱和脂肪酸在抗结核菌感染自噬作用中的关系，为探索控制耐药结核病流行新途径提供科学依据。

结核病严重威胁人类健康，耐药结核病的危害日益凸显。早期研究发现营养因素对结核病发病与预后都有显著影响，但机制不明。近年来有关自噬作用与脂代谢的研究提示多不饱和脂肪酸可能在自噬机制中起重要作用，但缺乏人群研究资料。.1.本项目采用病例对照研究方法，收集耐药结核病患者113例作为病例组，其中男性80例，女性33例。平均年龄为43.20±18.06（岁）。健康体检者109例作为对照组，其中男性78例，女性31例。平均年龄为46.94±18.03（岁）。两组在基本人口学特征指标上未见统计学显著性差异。通过皮脂厚度计测量研究对象右肩胛角下方和上臂部皮脂厚度，计算体脂肪百分比，并比较两组间差异，结果显示耐药结核患者组皮脂厚度、身体密度和体脂肪百分比均低于健康对照组，呈统计学显著性差异（P<0.01）。.2.采用24小时膳食回顾法对耐药肺结核病患者组和健康对照组能量及营养素摄入水平进行比较研究，使用营养计算器对被调查者的所有食物种类和重量进行计算，结果显示两组蛋白质、脂肪、锰、核黄素、抗坏血酸、维生素E摄入水平有统计学显著性差异（P<0.01）。耐药肺结核病患者组以上营养素摄入水平较低。.3.采用气相色谱法对耐药肺结核病患者组和健康对照组血中红细胞膜多不饱和脂肪酸（PUFA）进行检测，主要包含ω-3PUFA（EPA、DHA、ALA）与ω-6PUFA（LA、AA、DTA、DPA）。结果显示耐药肺结核病患者组总ω-6PUFA较对照组比例高，呈统计学显著性差异（P<0.01）。而总ω-3PUFA在两组之间未见统计学显著性差异。两组间ω-6PUFA/ω-3PUFA比值未见统计学显著性差异。提示ω-6PUFA在耐药结核发病过程中可能发挥作用。.4.选择添加ω-3PUFA中的EPA、DHA和ω-6PUFA的AA观察多不饱和脂肪酸对感染结核菌后巨噬细胞自噬相关指标（Beclin1和LC3）mRNA表达量的影响，结果显示三种多不饱和脂肪酸都未对Beclin1和LC3 mRNA表达量造成统计学上显著性变化（（P>0.01）。.结论：耐药肺结核病患者较健康者多项营养指标降低，ω-6PUFA和耐药结核发病可能相关，但在抗结核菌感染自噬作用中的关系仍需进一步探讨。.