Perlecan对宫内生长迟缓大鼠肾脏的影响及对凋亡的调控作用研究

宫内生长迟缓（IUGR）可通过"胎儿程序化"途径对机体各器官功能产生长期以至终生的影响，与成年期严重危害人类健康的疾病如高血压、糖尿病、慢性肾脏病等均有关系。Perlecan（PN）参与细胞增殖、分化和粘附、组织发育和器官形成以及细胞信号的转导等。本课题拟通过已建立的SD大鼠IUGR模型，探讨PN与肾单位数目、肾组织细胞增殖和凋亡、蛋白尿及肾功能变化的相关性；观察RNA干扰PN表达敲低和基因转染PN高表达处理后肾小球足细胞和内皮细胞增殖、凋亡的变化及相关生物学特性的改变。从PN的角度进一步探讨IUGR引起肾损伤的可能分子发病机制，为今后临床对IUGR患儿的合理干预以及寻找胎儿起源的成人肾脏疾病的治疗寻找新靶点。

宫内生长迟缓（IUGR）可通过“胎儿程序化”途径对机体各器官功能产生长期以至终生的影响，与成年期严重危害人类健康的疾病如高血压、糖尿病、慢性肾脏病等均有关系。Perlecan（PN）参与细胞增殖、分化和粘附、组织发育和器官形成以及细胞信号的转导等。目前有关IUGR引起生后肾小球数目减少和肾脏疾病的确切发病机制尚无明确定论。本课题通过建立IUGR动物模型，研究不同时点的肾组织中PN的表达量、肾组织细胞增殖和凋亡及其关键因子的表达情况、蛋白尿严重程度和肾功能，并探讨PN与肾单位数目、细胞增殖和凋亡、蛋白尿发生及肾功能变化的相关性。研究显示：1）通过孕期全程低蛋白（6%蛋白质）饮食建立IUGR大鼠模型，制模成功率高达95%。IUGR 大鼠出生体重、成年期体重及肾小球数目均明显减少，生后随访中蛋白尿发生率明显增加。提示IUGR是CKD发生发展的高危因素，需重视孕母的营养。2）PN表达于肾小球和肾小管，经免疫组织化学法、实时荧光定量PCR及Western blot证实E18、P0时间点IUGR组大鼠肾脏PN表达量均低于正常对照组（CON组）（P<0.05）。3）利用Ki-67标记和TUNEL检测IUGR组和CON组大鼠不同时间点肾脏凋亡和增殖水平：P0、P1w时间点IUGR组大鼠肾脏生肾区凋亡指数明显增高而增殖指数无显著性差异；进一步探讨IUGR组大鼠肾组织细胞凋亡增多的可能机制，显示细胞凋亡抑制因子Bcl-2在IUGR组新生鼠肾脏表达水平较CON组降低，而促凋亡因子Bax表达增高，同时Caspase3剪切体水平增高，提示线粒体途径可能是IUGR大鼠肾脏生肾带细胞凋亡增多的重要机制之一。此外，E18时间点IUGR胎鼠肾脏生肾区增殖指数明显降低而凋亡指数无显著性差异，探讨IUGR组大鼠肾脏细胞增殖降低的现象并探讨可能的机制：显示IUGR组AKT磷酸化显著低于CON组，而ERK磷酸化水平无明显变化，提示AKT磷酸化水平降低可能是IUGR组细胞增殖水平降低的主要机制。上述结果提示具有细胞凋亡保护作用的Perlecan的表达明显降低，细胞凋亡的异常发生与IUGR肾脏发育的异常、肾单位数目的减少相关。通过此项研究，进一步探讨了IUGR的可能分子发病机制，并为今后临床对IUGR患儿的合理干预、寻找胎儿起源的成人肾脏疾病的治疗靶标提供理论依据。