动脉粥样硬化中血小板活化与纤维蛋白原的调控

At present, there is little information available about platelet activation and the regulation of P-selectin expression in atherosclerosis. In this study, we used an atherosclerosis animal model to determine the effects of variations in plasma fibrinogen (Fg) concentrations on platelet activation and P-selectin expression in atherosclerosis by using ELISA, flow cytometry, western blotting, PCR, and other analytical methods. We used key techniques such as mRNA translation inhibition and amino-acid radiolabeling to quantify protein synthesis for the first time, combined with the use of an mRNA translation inhibitor, β-3 integrin antagonist, input Fg, and other special means. The aim of this study was to investigate whether platelet P-selectin mRNA expression and protein synthesis increase with an increase in Fg concentration in atherosclerosis; to study whether the function of Fg, i.e., upregulation of platelet P-selectin, is blocked when P-selectin mRNA is interfered or β3 integrin is closed; and to elucidate the mechanism of Fg regulation and its effect on platelet activation and P-selectin expression in atherosclerosis. We believe that the findings of our study will help understand the mechanism of atherosclerosis and provide insight into the intervention target of atherosclerosis.

目前关于在动脉粥样硬化（AS）形成中血小板活化及P-选择素的表达调控可利用的资料很少。本研究运用AS动物模型采用ELISA、流式细胞仪、Western blot、PCR等方法探明动脉粥样硬化不同血浆纤维蛋白原水平对血小板活化及P-选择素表达的影响。首次采用mRNA翻译抑制、放射性标记的氨基酸插入合成蛋白等关键技术，结合mRNA翻译抑制剂、β3 integrin 拮抗剂、输入纤维蛋白原等特殊手段，探索动脉粥样硬化中血小板内P-选择素mRNA含量及其蛋白合成是否因环境中纤维蛋白原增加而升高，以及在P-选择素 mRNA受到干扰、或β3 integrin被封闭时，纤维蛋白原刺激上调血小板P-选择素的作用是否受到阻断，揭示纤维蛋白原在动脉粥样硬化形成中对血小板活化及P-选择素表达的调控作用及其机理，有利于对动脉粥样硬化机制的认识和寻找干预的靶点。

目前有关动脉粥样硬化形成中血小板活化及P-选择素表达调控可利用的资料很少，本项目在建立动脉粥样硬化动物模型的基础上，采用ELISA、流式细胞仪、Western blot、PCR、免疫组化等多种方法检测纤维蛋白原、P-选择素、整合素αIIbβ3、CD40L、GPIbα的含量及表达，和炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-17等的水平，以及血小板内IL-1β的pre-mRNA、CD40LmRNA、αIIbβ3mRNA等的表达。通过设计大量实验，研究了动脉粥样硬化中纤维蛋白原与血小板活化的相关性；并观察动脉粥样硬化发展过程中不同血浆纤维蛋白原水平、β3integrin拮抗剂对血小板活化αIIbβ3、CD40L、P-选择素表达的作用及影响；体外孵育纤维蛋白原对血小板P-选择素表达的影响；分析了动脉粥样硬化中纤维蛋白原对血小板活化及P-选择素表达的调控。结果发现，在动脉粥样硬化发生过程中存在血小板活化现象，高纤维蛋白原水平、β3integrin拮抗剂的干预改变了血小板活化状态及相关炎症因子的水平。研究揭示了动脉粥样硬化中血小板活化和纤维蛋白原的相互作用；血小板活化后相关炎症因子激活内皮细胞，促进P-selectin沉积，影响动脉粥样硬化的发生发展；高纤维蛋白原水平刺激上调血小板P-选择素，促进血小板活化，而β3integrin拮抗剂可以阻止这一作用，表明纤维蛋白原通过与血小板β3 integrin结合，可以调控血小板活化聚集，从而影响动脉粥样硬化的进程。研究结果有利于对动脉粥样硬化机制的认识和寻找实施干预的靶点。