潜阳育阴方调控肾脏花生四烯酸代谢网络及前列腺素功能紊乱治疗高血压肾损伤的机制研究

Renal injury is the main complication of hypertension. In hypertensive patients, the main molecular mechanism of hypertensive renal injury is that AngII activates NF-κB pathway and subsequently leads to the disorder of arachidonic acid (AA) metabolic network and prostaglandin's function. Qianyangyuyin formula is an experimental formula of Tang-shuhua, the famous old TCM doctors in our hospital, both clinical trials and laboratory research has confirm the beneficial effect of Qianyangyuyin formula on hypertensive renal injury, but the underlying mechanisms remains to be further study. So, we propose that the the disorder of AA metabolic network and prostaglandin's function is the main molecular mechanism of hypertensive renal injury, and Qianyangyuyin formula may treat hypertensive renal injury via modulating such pathway. Based on our hypothesis, we will study the modulation effects of Qianyangyuyin formula on AA metabolic network and related signal pathways, nuclear receptors, transcriptional factors, etc. we employ Confocal laser scanning, qPCR, Western Blot and ELISA techniques to study the mechanism of Qianyangyuyin formula on hypertensive renal injury from mRNA, protein and cellular, histomorphological levels, to unveil the mechanisms of how Traditional Chinese Medicine improves the physique of hypertensive patients, prevents or treat hypertensive renal injury via muti-levels and multi-targets method.

肾损伤是高血压的主要并发症，研究表明，高血压患者AGII激活NF-κB信号通路，由此导致花生四烯酸代谢网络及前列腺素功能紊乱是高血压肾损伤中的重要分子机制。潜阳育阴方是我院名老中医唐蜀华教授经验方，临床和实验研究均证明具有治疗高血压肾损伤作用，但是其作用机制尚有待于进一步深入。据此，我们提出高血压状态下肾脏血管内皮细胞AA代谢网络及前列腺素功能紊乱是导致高血压肾损伤的主要机制，潜阳育阴方通过调控AA代谢网络及相关信号通路治疗高血压肾损伤。根据以上科学假说，本项目拟研究潜阳育阴方对花生四烯酸代谢网络及相关信号通路、核受体、转录因子等的调控作用，采用激光共聚焦扫描、qPCR、Western Blot、ELISA等实验技术，从mRNA、蛋白水平及细胞、组织形态学等不同层次探讨潜阳育阴方治疗高血压肾损伤的作用机理，多层次、多靶点揭示中药复方改善高血压患者体质、防治高血压肾损伤的作用机制。

肾损伤是高血压的主要靶器官损害，研究表明，高血压患者AngII激活NF-κB信号通路，由此导致花生四烯酸代谢网络及前列腺素功能紊乱是高血压肾损伤中的重要分子机制。潜阳育阴方是我院长期运用于临床的改善高血压肾损伤有效方剂，本研究通过体内、体外实验证明了潜阳育阴颗粒能够改善肾脏花生四烯酸代谢网络及前列腺素功能紊乱相关的血管炎症反应，体内实验基于SHR大鼠及WKY大鼠，体外实验基于肾小球系膜细胞（HMCs）及人脐静脉细胞（HUVEC），研究首先阐明了潜阳育阴颗粒对高血压引起的早期肾脏损害具有一定的改善作用，进一步研究发现潜阳育阴颗粒主要通过干预AngII/NOX4/ROS通路减少NOX4，Rac1和p22phox表达，降低ROS的水平，调控NF-κB信号通路，有效抑制下游TNF-α、IL-1β、IL-6、VCAM-1、ICAM-1炎症因子上调造成的ECM沉积，从而改善肾损害，起到一种抗氧化或炎症抑制剂的作用；另一方面，潜阳育阴颗粒可能部分通过阻断TLR2/4/MyD88信号通路，有效抑制TLR2、TLR4及MyD88的大量产生和炎症因子的释放，部分作用于AngII-AT1R-CTGF通路及TGF-β1–TIMPs–Col-IV通路改善肾损害，也可能起到一种炎症抑制剂的作用；而其又能拮抗AngII诱导HUVEC的凋亡效应，机制可能与下调Fas、FasL、caspase3蛋白表达有关。研究中发现潜阳育阴颗粒各剂量组之间呈一定的剂量依耐性，在大剂量时抑制氧化应激及炎症反应的作用更加明显，可作为临床用药剂量调整的基础。.课题组经过4年的努力，已完成拟定的研究计划。通过本项目的研究，我们阐明了潜阳育阴颗粒可以通过抑制肾脏血管内皮细胞及肾系膜细胞氧化应激及炎症反应，调控AA 代谢网络及前列腺素功能，发挥改善高血压引起的肾纤维化及肾损害的作用，体现了潜阳育阴颗粒在改善高血压形成的肾纤维化及肾损害方面具有多靶点的作用，为中药治疗高血压提供进一步的药理学证据；也为同类中药治疗高血压肾损伤提供共性研究思路和技术方法。