子痫前期-子痫患者胎盘滋养细胞14-3-3信号蛋白修饰及功能的研究

本项目拟应用功能蛋白质组研究技术研究子痫前期-子痫疾病发生过程中胎盘滋养细胞14-3-3信号蛋白的修饰及功能的研究。应用显微微切割技术收集胎盘滋养细胞，应用二维微高效液相色谱和离子回旋串联质谱分析系统的方法鉴定14-3-3蛋白的结构，确定磷酸化位点及磷酸化定量；并应用传统的Edman降解法、Western 印迹及免疫荧光分子生物学的方法验证。并将14-3-3基因应用质粒转染滋养细胞以建立稳定的基因表达，从而确定其在滋养细胞内的功能。应用酵母双杂交技术，构建其诱饵蛋白，检测其修饰后的蛋白间相互作用，建立14-3-3蛋白在子痫前期-子痫疾病滋养细胞的相互作用图谱，阐明其在子痫前期-子痫疾病发病中的分子机制作用。