利用药物分析的组合技术研究“广陈皮”道地性内涵

道地药材不仅是指货真质优的药材，也是中药学中控制药材质量的一项独具特色的综合标准。本研究以"广陈皮"为材料，借助于各种分析手段，多层次、多指标的系统研究"广陈皮"的道地性内涵。利用DNA条形码技术对"广陈皮"道地性的生物学内涵进行分子水平的分析；利用UPLC及LC-MS技术研究"广陈皮"水溶性化学组分的道地性特征；利用GC及GC-MS技术分析"广陈皮"中脂溶性化学组分的道地性特征；利用ICP-MS分析"广陈皮"中各元素的道地性特征；利用近红外光谱技术分析"广陈皮"中蛋白质、多糖、纤维等生物大分子的道地性特征；利用现代显微成像技术分析"广陈皮"中细胞、组织等结构上的道地性特征。将以上各种药物分析方法的评价指标进行系统整合，建立"广陈皮"的道地性指标的综合量化体系。通过比较"种内变异与种间变异"的程度，初步解释广陈皮的道地性内涵，解决长期以来"广陈皮"道地性研究不系统、不全面问题。

本研究以不同来源的陈皮样品为研究对象，借助于多种药物分析技术及统计分析方法对分别从分子遗传、显微组织、化学成分、大分子物质等四个层面，通过比较广陈皮与一般陈皮的差异，研究广陈皮道地性内涵的数字化评价指标。主要建立了不同来源陈皮的trnH-psbA和ITS序列的DNA条形码候选序列库，用UPGMA方法建立了陈皮近缘种间的亲缘关系。结果显示，trnH-psbA序列可鉴别柑橘类与橙类种间的差异，ITS序列则可以鉴别柑橘类的差异，两个序列的组合DNA条形码可鉴别出茶枝柑与其他近缘种的差异；利用数字化图像技术对21种不同来源的陈皮体视显微特征、横切面特征以及粉末的显微特征进行图像采集与分析，利用统计分析技术，研究建立了广陈皮道地性的显微鉴别特征指标，研究发现陈皮油室大小及单位面积油室个数具有一定的组织结构特征性；建立了陈皮水溶性成分的UPLC指纹图谱，根据相似度（S）比较结果，可把不同来源的陈皮分为三类，第I类：温州蜜橘和橙（S≤0.4）；第II类：漳头红和蕉柑（0.8≤S≤0.87），第III类：茶枝柑、八月橘、十月橘、贡柑、年橘、椪柑、芦柑、福橘、马水橘、阳山橘、红橘、南丰蜜橘、四会青皮蜜橘（S≥0.88）。利用主成分分析进一步比较第III类陈皮，结果第III类陈皮分为四个区：茶枝柑区、十月橘区、贡柑区及混合区。以上结果表明广陈皮与其他陈皮在水溶性成分存在明显差异，可用于广陈皮道地性鉴别。建立了陈皮挥发油的GC指纹图谱，结果分为四个区：茶枝柑区、3个混合分布区。利用主成分分析可发现广陈皮与其他陈皮的挥发油存在明显的差异。利用GC-MS对陈皮的挥发油成分进行了鉴定，发现广陈皮中的γ-松油烯、2-甲氨基-苯甲酸甲酯和柠檬烯的含量组成特点可用于鉴别广陈皮与其他陈皮；利用近红外技术，建立了广陈皮的一致性检验模型。聚类分析发现广陈皮与其他陈皮在近红外模型上存在一定的差异；同时以广陈皮为校正集，建立了广陈皮道地性评价的一致性模型，该模型能对广陈皮和其他陈皮进行快速的辨别分析，是一种快速的道地性评价指标 。. 总之，通过本研究建立的四层分析技术，结合相应的数据分析方法，能鉴别不同来源的陈皮与广陈皮。本研究建立的广陈皮道地性综合分析体系，能通过比较广陈皮的不同层面上的差异反应其道地性内涵。本研究首次提出了广陈皮的道地性数字化指标，为初步揭示广陈皮道地性内涵提供了科学依据。