基于Th17/Treg细胞调节机制的熊果酸抗类风湿关节炎作用的研究

Rheumatoid arthritis(RA) is characteristic by synovitis with bone erosion. Th17/Treg unbalance plays a key role in RA inflammation and osseous destruction. Earlier study found ursolic acid (UA) could obviously suppress T cell proliferation, along with cell activation and NF-κB pathway in vitro.UA could also obviously restrain the joint swelling in collagen induced arthritis (CIA) rats, reducing IL-17 and TNF-α expression in joints, but the related mechanisms is unkown. It is presumed that UA may alleviate RA by suppressing Th17 cell differentiation. This project is to verify the hypothesis by 3 aspects including immune regulation, inflammation control and bone destruction prevention.1.UA regulates Th17/Treg unbalance in CIA rats through JAK/STAT signaling pathway. 2.The effects of UA on NF-kB signaling pathway activation and inflammatory cytokines expression on synovial membrane in CIA rats. 3. Set up T cell and synovial fibroblasts co-culture system,then research the effects of UA on fibroblasts proliferation, apoptosis and osteoclasts regulation through Th17/IL-17/RANKL pathway. We intend to explain why UA alleviates RA.The aim of this study is to expand the UA clinical usage, provide theoretical proof to develop a new herb extracts for RA treatment.

滑膜炎症及骨破坏是类风湿关节炎（RA）的特征。Th17/Treg细胞失衡在RA炎症及骨破坏过程起关键作用。前期发现熊果酸（UA）可显著抑制T细胞活化与NF-κB激活，显著抑制胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠关节肿胀、减轻骨质破坏，抑制关节中IL-17和TNF-α表达，但机制不明。推测UA可能通过抑制Th17细胞分化来阻止炎症发展和关节破坏。本项目从免疫调节、炎症控制、破骨调控三方面研究UA抗RA的机制：1.UA在CIA大鼠通过JAK/STAT通路调节Th17/Treg失衡；2. UA对CIA大鼠滑膜NF-κB通路及炎症因子的作用；3.建立T细胞与滑膜成纤维细胞共培养体系，从Th17/IL-17/RANKL途径研究Th17分化对滑膜成纤维细胞增殖、凋亡、破骨调控的影响及UA的干预作用。对UA抗RA作用的进一步阐明，为扩大其临床应用及进一步开发新型抗类风湿中成药提供重要的科学依据。

本项目研究发现，熊果酸（Ursolic Acid, UA）能够调节CIA模型发病过程中的Th17/Treg 细胞失衡，缓解关节炎症程度，这些作用与IL-17-TNF-α-RANK/RANKL路径有关；UA与甲氨蝶呤在抗关节炎上有一定的协同作用。结果提示，UA是一种高效低毒的改善病情抗风湿中药提取物，有良好的开发利用价值。.本团队采用雌性wistar大鼠尾根部皮内注射CII/IFA乳剂及7天后加强免疫的方法，成功建立了一种操作简便、发病率高、病理程度适中，疾病病理差异性低的CIA大鼠模型。UA 100mg/Kg给予大鼠灌胃，能够有效抑制 CIA 大鼠关节软骨病理改变，减少TNF-α、IL-17、PGE2 等促炎性细胞因子在关节中的表达。. 进一步研究Th17—IL-17—TNF-a—RANK/RANKL途径在RA发病的机制及UA的干预作用：CIA大鼠外周血淋巴细胞中出现Th17/Treg细胞失衡，给予大鼠UA（50mg/Kg、100mg/Kg）能显著抑制这种飘移。CIA模型组大鼠CD4+T细胞RORr分子表达增加，FoxP3表达下调，而UA给药能够减少 RORr分子表达，增加FoxP3分子表达，并且增加SOCS3的表达。UA 能明显改善CIA 大鼠的足肿胀，减少关节炎评分，UA 还改善了CIA 大鼠的关节X线表现。CIA大鼠关节软组织中炎症和破骨相关分子 IL-17A、IL-6、TNF-α、IL-1 β、RANKL、RANK、OPG、MMP1、MMP2、MMP9 和 MMP13 mRNA表达增加，炎症抑制性细胞分子 IL-10、TGF-β mRNA表达减少，而UA或者MTX给药，能够减少这些炎症和破骨分子的表达，增加IL-10、TGF-β mRNA表达。. 项目组成员还构建了“寒痹”相关的类风湿关节炎病症结合模型。给予大鼠一定量的“风寒湿”刺激后，AIA大鼠关节炎发病时间显著提前，关节炎发病率明显提高，体重下降，后足肿胀度增加，CD4+ T 细胞亚群增多。经过风寒湿刺激的AIA大鼠明显畏寒，蜷卧懒动，大便较稀，舌质偏淡白、饮水量显著减少，热刺激扯足时间显著增加，提示动物出现“寒证”。. 本项目组还进行了祛风止痛煲治疗产后痹痛的临床观察。选取了56例产后痹患者，治疗8个疗程，发现患者中医症状积分较治疗前均有显著改善，可明显改善患者关节症状及全身症状.