G蛋白偶联受体的克隆及其结构与功能研究

合成了两个由35个寡核苷酸级组成的引物，通过PCR法从鼠脑海马λZAP库中初步拉出一个目标基因，DNA顺序分析表明此受体结构具有七穿膜结构。转染进CHO细胞并作表达后细胞表明不仅该基因能在CHO细胞中表达，而且表达物能与同位素标记的记忆增强肽AVP（4-8）表现特异性结合。采用杂交印迹法和酶法证明AVP（4-8）可以激活脑内PKC的信号途径，AVP（4-8）在鼠海马受体结合后的信号转导有两支途径，其一通向CaMKII引发LTP，另一通过MAPK促进NGF的表达，而分叉点就在PKC处。鼠脑内AVP（4-8）受体的生化性质研究表明，该受体是一个与AVP受体不同听G蛋白偶联受体。AVP（4-8）的拮抗剂ZDC（C）PR和G蛋白阻断剂能够完全阻断AVP（4-8）刺激的信号转导系统，如MAPK活性和CaMKII自身磷酸化，但对AVP的作用并无应响。