一个在小细胞肺癌细胞株SH77中高表达新基因片段的克隆与功能鉴定

在采用Affymetrix 公司人类基因组U133系列芯片杂交筛选中国人小细胞肺癌细胞株SH77及其对应的多药耐药细胞株SH77/CDDP，获得一条在SH77中高表达新基因片段的基础上，用cDNA末端快速扩增法（RACE）获得其全长cDNA序列并进行编码蛋白质序列和结构的预测、染色体定位；经原核表达取得蛋白抗原，免疫家兔后制备抗该蛋白的多克隆抗体；采用多组织Nothern blot 检测该基因在各组织中的表达分布情况；采用RNA干扰技术，构建能在细胞内表达小干扰RNA、特异沉默该基因的重组质粒，转染SH77细胞，经Western blot检验，建立可稳定下调表达该基因的小细胞肺癌细胞株，培养细胞，采用电镜、化疗药敏实验、流式细胞仪、RT-PCR等技术观察细胞形态、细胞生长增殖、细胞周期、凋亡、耐药相关基因的变化，从而了解该基因在小细胞肺癌以及在多药耐药中的作用，阐明其功能。