基于模型大鼠酒精性肝损伤CYP2E1基因调控机制的乌腺金丝桃组分配伍研究

The incidence of alcoholic liver disease is increasing year by year. Of ALD pathogenesis is very complex. Ethanol through the induction of CYP2E1 gene lead to liver microsomal free radical production increased consumption of endogenous antioxidants to increase and lipid peroxidation is one of the main reasons for alcoholic liver injury. After our preliminary studies found that black gland Hypericum inhibitory effect of elevated serum ALT activity of acute alcoholism. This project intends to analyze chemistry, systems biology, pharmacology, serum drug chemistry, interdisciplinary means, the establishment of a comprehensive separation, focus on separation of a combination of black glands of Hypericum component separation techniques; alcoholic liver injury model mouse pathology, serum ALT and AST activity was measured in liver TG content of the complexity of black gland Hypericum activity relationship; component compatibility of multi-target effects of integration mechanism the concept Chawu glands of Hypericum each component alone and compatibility impact and antagonistic rat model of acute alcoholic fatty liver of the molecular mechanisms of ethanol metabolic enzymes in rat liver model to study the multi-component compatibility integration regulating law, to provide compatibility for modern traditional Chinese medicine components basis.

酒精性肝病的发病率呈逐年上升趋势。ALD的发病机制非常复杂。乙醇通过诱导CYP2E1基因致肝微粒体自由基产生增多，内源性抗氧化剂消耗增加及脂质过氧化反应增强，是酒精性肝损伤的主要原因之一。经过我们前期研究发现，乌腺金丝桃对急性酒精中毒小鼠血清ALT活性升高有抑制作用。本课题拟采用分析化学、系统生物学、药理学、血清药化学等多学科交叉综合手段，建立全面分离，重点分离相结合的乌腺金丝桃组分分离技术；以酒精性肝损伤模型大鼠的病理学检查、血清ALT和AST活性测定、肝脏中TG含量测定等研究乌腺金丝桃的复杂组效关系；采用组分配伍多靶点效应整合机制研究，观察乌腺金丝桃各种组分单独应用和配伍后对模型大鼠肝脏乙醇代谢酶系的影响和拮抗模型大鼠急性酒精性脂肪肝的分子机制，研究多组分配伍的整合调节规律，为现代中药组分配伍提供依据。

目的：通过观察乌腺金丝桃对酒精性肝损伤模型大鼠的影响，探讨其复杂的组效关系及其对酒精性肝损伤的治疗作用及作用机制。.方法：. 1.将乌腺金丝桃洗净后称重，20倍量75%乙醇冷凝回流提取2次，每1.5-2小时。提取液旋转收干称重备用。浸膏溶于水，上大孔树脂柱，分别以30%, 60%, 90%.乙醇梯度洗脱，通过molish、盐酸-镁粉、碘-碘化钾、碘化铋钾、碘化汞钾、浓硫酸-乙酸配反应检识各流份，合并相近流份，得到不同部位。分析其主要成分。. 2.雄性Wister清洁级大鼠120只（180±220g），适应性喂养5天后称重，根据体重按照随机数表分为12组，每组十只。分组情况如下：空白组10只，模型组10只，阳性药组10只，乌腺金丝桃全草高中低剂量组各10只，30醇洗部位高低剂量组各10只，60醇洗部位高低剂量组各10只，90醇洗部位高低剂量组各10只.。除空白组外（空白组每日给予生理盐水灌胃，灌胃剂量与给酒组相同），其余各组均采取50%乙醇进行灌胃，大孔树脂不同梯度洗脱组按照相应的比例给予洗脱组分灌胃。测定血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性、肝体比值和肝脏甘三脂含量以及病理学改变,评价乌腺金丝桃拮抗急性酒精性肝损伤的效果。. 3.制备肝组织匀浆,测定乙醇脱氢酶（ADH）和乙醛脱氢酶（ALDH）的活性，评价乌腺金丝桃对ADH和ALDH活性的影响。. 4.蛋白白表达，RT—PCR法测定CYP2E1的mRNA水平。. 5.测定血清游离脂肪酸（FFA）含量，反映外周脂肪动员；测定肝脏中FFA以及血清中脂联素含量的动态变化,探讨乌腺金丝桃拮抗急性酒精性脂肪肝的分子机制。.结论：. 1.乌腺金丝桃总提物浸膏经大孔树脂初步分离其主要成分分别为糖类、黄酮类、生物碱类。60%乙醇洗脱部位为含黄酮类成分。. 2.乌腺金丝桃60%乙醇洗脱组分对大鼠酒精性肝损伤疗效显著，能够明显降低MDA，TG的指标，可显著升高SOD，GSH。. 3.乌腺金丝桃能够显著的抑制大鼠肝脏CYP2E1活性和蛋白水平，这可能是其拮抗急性酒精性肝损伤的机制之一。. 4.乌腺金丝桃能够显著抑制血清和肝脏FFA的水平，这可能与乌腺金丝桃抑制外周脂肪动员和抑制FAS有关。