新型恶性肿瘤淋巴管导向肽TMVP1的获得及肿瘤淋巴转移靶向阻遏的实验研究

淋巴转移是肿瘤细胞播散的早期事件，亦是乳腺癌难以根治和高死亡率的重要原因。探索发现肿瘤淋巴管的特异性靶向分子，实现定向药物运输，是目前肿瘤分子靶向治疗的难点和重点。TMVP1是我中心前期筛选蛋白VEGFR-3胞外区获得的一段肿瘤淋巴管的导向肽，本项目拟从TMVP1的功能鉴定及应用研究入手，一方面，运用生物信息学模拟预测多个TMVP1重复串联多肽的空间构象与理化特性，验证相应的功能演变，并引入模式生物-斑马鱼，动态监测TMVP1在新生淋巴管生成过程中的靶向性识别作用，免疫竞争拮抗实验检测其识别效应的特异性；另一方面，构建小鼠角膜微袋肿瘤模型及SCID鼠乳腺癌原位移植模型，制备多个TMVP1与脂质体阿霉素的交联物，探讨后者对肿瘤淋巴管生成与转移的靶向抑制效应，同时减少化疗药物的毒副作用。本项目如获成功，将为多肽载体的应用带来新的理论依据和实践经验，并为制定靶向性治疗恶性肿瘤的方法和体系奠定基础

短肽是一种理想的肿瘤细胞靶向分子。我们利用前期建立的新型肽库技术发现了一种对肿瘤淋巴管有良好的靶向亲和作用5 肽序列（“TMVP1”肽），在此基础上，我们进行了多肽TMVP1在肿瘤淋巴管的早期诊断性示踪特异性和在靶向性抗肿瘤淋巴管生成与转移治疗中的作用的相关研究。研究结果显示，TMVP1能在体外对表达VEGFR-3的淋巴管内皮细胞LEC具有良好的靶向亲和作用；TMVP1对于乳腺癌原位移植模型、角膜微袋肿瘤生长模型及模式生物-斑马鱼体内的肿瘤淋巴管也有很好的靶向识别效应，并且FITC-TMVP1肽在体内的靶向识别能力与时间、浓度成正相关，预示着TMVP1肽在肿瘤的早期诊断、靶向识别与杀伤的可能应用前景；由于TMVP1-脂质体阿霉素制备存在困难，我们采用抗菌肽代替脂质体阿霉素，制备了一种多肽TMVP1-GG-D(KLAKLAK)2（称为TMVP1-DKK），TMVP1本身没有毒性作用，但连接效应片段后，结果显示，TMVP1-DKK处理后体外新生淋巴管所形成的淋巴管新芽及管腔样结构明显减少；在低浓度的TMVP1-DKK处理后在荧光体式显微镜下进行斑马鱼淋巴管的观察，可以观察到淋巴管的生成受到抑制；小鼠角膜肿瘤模型中TMVP1-DKK表现出对小鼠角膜肿瘤及新生淋巴管的明显的抑制效应；多肽TMVP1-DKK处理后的乳腺原位肿瘤中LYVE1阳性管腔的染色明显较对照组少，表现出新生淋巴管生成的抑制作用。综上所述，TMVP1肽与药物偶联后可明显增强药物的靶向性治疗，减少毒副作用，有望成为临床新药，具有广阔的应用前景。