抑癌基因ING4调控Fas/FasL凋亡通路影响黑素瘤免疫逃逸能力的研究

黑素瘤恶性程度高，对常规治疗均不敏感，成为临床治疗难题。导致这一难题的出现，可能与黑素瘤强的免疫逃逸能力有关。Fas/FasL途径是肿瘤实现免疫逃逸的重要机制。通过前期工作发现，肿瘤抑制因子ING4能够抑制黑素瘤生长促进凋亡，并能调控Fas/FasL凋亡通路核心蛋白caspase3的表达。基于以上发现，本课题进一步研究ING4对黑素瘤免疫逃逸能力的影响。将从四个方面进行论证：1.ING4对Fas/FasL通路活化的影响；2.验证Fas/FasL通路参与黑素瘤免疫逃逸的机制；3.ING4通过Fas/FasL通路对黑素瘤细胞免疫活性的影响；4.ING4对黑素瘤细IFNα-2b免疫治疗敏感。总之，本研究将深入探讨ING4诱导黑素瘤细胞凋亡及通过影响瘤细胞免疫活性发挥肿瘤抑制效应的机制，并通过此机制探讨对黑素瘤免疫治疗的影响，为黑素瘤治疗寻找新的思路及为未来黑素瘤基因治疗提供实验室理论依据。

研究发现，抑癌基因ING4可通过影响细胞周期、细胞凋亡、血管生成、侵袭和转移等过程发挥抑癌作用。本研究旨在探讨ING4在体外及体内对恶性黑素瘤凋亡和免疫逃逸能力的影响及相关作用机制。 本研究采用免疫组化法检测恶性黑素瘤组织中ING4、Fas及FasL的表达情况。体外构建慢病毒-ING4基因的重组表达质粒及ING4干扰表达质粒，转染入人恶性黑素瘤细胞系A375，采用MTT法检测细胞增殖及活力，采用Tunel法及流式细胞术检测细胞的凋亡情况，采用蛋白印迹法对转染细胞ING4、Fas/FasL凋亡通路蛋白的表达情况进行鉴定，并通过动物实验检测ING4对恶性黑素瘤生长的影响。此外，将黑素瘤细胞与淋巴细胞共培养，通过体内、外实验验证ING4对黑素瘤细胞免疫逃逸能力的影响。通过上述实验我们发现：与色素痣比较，黑素瘤组织中ING4、Fas的表达明显降低，而FasL的表达显著增高。过表达的ING4能够明显抑制A375细胞的增殖，促进其凋亡，并且能够上调Fas、裂解后caspase-8，caspase-3表达，下调FasL及PARP表达，沉默组结果相反。上述实验结果表明ING4在促进黑素瘤凋亡及抑制其增殖方面发挥重要作用，并且能够通过激活Fas/caspase-8凋亡通路发挥促凋亡作用。