死亡结构域沉默子分子靶向在儿童难治性急性淋巴细胞白血病治疗中的研究

死亡结构域沉默子(silencer of death domains,SODD)是新近发现的一个凋亡调控基因,在一些人类肿瘤细胞株中持续高表达。高表达的SODD可抑制肿瘤细胞凋亡，进而出现化疗耐药，若抑制SODD蛋白表达，则可恢复肿瘤细胞凋亡敏感性。本项目设计以临床为基础，探讨SODD在儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）发生发展、化疗反应性及预后中的临床意义，并在体外建立耐药白血病细胞模型，从分子和基因水平阐明SODD抗凋亡信号途径及对化疗疗效的影响，寻找阻断SODD抗凋亡途径的关键性靶点及药物，在ALL动物模型中，应用小分子干扰技术将针对SODD的基因治疗联合化疗药物用于ALL治疗中，拟期证实靶向SODD的分子及基因治疗在ALL治疗中的潜在价值，为儿童难治性ALL的治疗开拓新方法，并为靶向于抗凋亡分子的基因治疗的临床应用提供理论及实验依据。

死亡结构域沉默子(Silencer of death domains，SODD)是BAG蛋白家族新成员即BAG-4,是新近发现的一个凋亡调控基因，能阻断TNF-α/TNFR1凋亡受体途径，在肿瘤细胞异常增殖及逃避凋亡中发挥了重要作用。研究表明：在多种人类肿瘤细胞中SODD成持续高表达状态，高表达的SODD可抑制TNFR1介导的细胞凋亡，若抑制胞内SODD的表达，则无需激活TNF/TNFR1途径，即可诱导凋亡的发生。本实验研究设计以临床为基础，探讨SODD在儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）发生发展、化疗反应性及预后中的临床意义，并在体外建立耐药白血病细胞模型，从分子和基因水平探讨SODD表达对肿瘤细胞增殖及凋亡的影响，寻找特异下调SODD表达的靶点药物并从分子机制揭示SODD靶点药物通过下调SODD表达的促凋亡机制。同时建立移植性人类白血病小鼠模型，在体内应用小分子干扰技术将针对SODD的基因治疗联合化疗药物用于ALL治疗中拟期证实靶向SODD的分子及基因治疗在ALL治疗中的潜在价值，为儿童难治性ALL的治疗开拓新方法。本课题已基本按设计思路完成，并取得了相应的实验数据，结合临床信息及实验数据分析，可得出以下结论：1）SODD蛋白高表达于儿童ALL骨髓细胞且与患儿临床分型、化疗反应性及预后存在一定的相关性；2）SODD是微管靶点类药物VCR及Taxol的作用靶点而非其余几种化疗药物的作用靶点，抑制白血病细胞SODD表达后显著增加了白血病细胞对SODD靶点药物的化疗敏感性，反之增高SODD表达的细胞对化疗药物作用不敏感；3）Nalm-6急性淋巴细胞白血病细胞静脉接种5W SCID小鼠, 3-4WSCID鼠白血病发病率为100%；4）小鼠体内研究结果与体外细胞水平结果相似，提示降低SODD表达能增加白血病细胞对药物的敏感性，且SODD靶点药物与SODD　RNAi干扰质粒联合可增强化疗效应。本研究结果一定程度上为靶向于抗凋亡分子的基因治疗的临床应用提供了理论及实验依据。