抗原偶联的稳态凋亡细胞的制备及其诱导抗原特异性免疫耐受的实验研究

免疫耐受重建和免疫耐受诱导是自身免疫病和异基因移植研究领域的重要研究课题和最终目标。此目标的实现将克服目前无选择性免疫抑制治疗带来的严重的健康问题。机体细胞的不断更新和机体对凋亡细胞的清除是维持自身免疫耐受的重要机制之一。这一机制的打破将导致自身免疫病（如系统性红斑狼疮）。凋亡细胞诱导耐受的独特之处是温和而高效。因此，应用凋亡细胞诱导免疫耐受的治疗策略具有极好的临床前景。但是，对某些组织细胞来说（如，自身免疫性糖尿病的胰岛beta细胞），获得足够量的携带自身抗原的细胞用于这一治疗将非常困难。因此，如何用较易获得的替代细胞偶联靶抗原作为自身抗原载体将是解决这一难题的关键。本研究将建立一种简单易行的方法将抗原蛋白通过共价连接偶联到小鼠脾细胞的表面，并对抗原偶联的凋亡脾脏细胞诱导所偶联蛋白抗原的免疫耐受进行系列的动物实验和体外实验研究。目的是将有效方案推向临床，为自身免疫病和异基因移植患者服务。

自身免疫耐受的维持是机体预防自身免疫病的自我防御机制。自身组织细胞在自我更新中不断发生稳态凋亡在免疫耐受的维持中至关重要。因此，应用凋亡细胞温和高效地诱导机体免疫耐受的治疗策略具有极好的临床前景。在本课题中，我们首先采用模型蛋白雪蓝蛋白（KLH）和卵白蛋白（OVA）对蛋白抗原偶联方案进行了研究并摸索出了抗原偶联的最佳方案。进而，我们对这两种抗原偶联脾细胞输注诱导的体内免疫反应进行了探讨，发现抗原偶联脾细胞输注的确能够诱导抗原特异性免疫反应，而且较可溶性大剂量蛋白加佐剂产生的的免疫应答更强。接下来，我们分别对抗原偶联凋亡脾细胞诱导自身免疫耐受和凋亡树突状细胞诱导体内异基因免疫耐受进行了深入研究。在自身免疫性脑脊髓神经脱髓鞘小鼠疾病模型中，结果显示，静脉输注髓鞘少突胶质细胞糖蛋白MOG35-55 偶联的小鼠凋亡脾细胞对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）具有显著的预防和治疗作用，而且发现此防治作用可能与上调抗原特异性CD4+Foxp3+T 细胞及抑制病理性 Th17 细胞有关。另一方面，我们的实验结果证明，稳态凋亡的树突状细胞输注能够有效诱导异基因免疫耐受，而且发现PD1/PDL1相互作用对异基因免疫耐受的诱导有关。凋亡细胞为基础的抗原特异性免疫耐受诱导，可克服无选择性免疫抑制剂全面免疫抑制造成的近期的不良反应，对自身免疫病治疗具有重要的现实意义。在此基础上，我们尚探讨了抗原偶联脾细胞体内诱导抗肿瘤免疫的效能。我们发现肿瘤抗原（GP100）偶联的非UVB照射脾细胞输注能够诱导显著增强的抗黑色素瘤作用。因此，我们的抗原偶联技术为基于肿瘤抗原的肿瘤的免疫治疗奠定了基础，具有潜在的临床应用前景。