蓝舌病毒内蒙分离株重组DNA探针构建及序列分析研究

将BtCryIA（C）3.5kb全长基因及其两种3’端不同程度缺失的基因（2.1kb,1.8kb）分别与水稻叶绿体的psbA基因启动子和终止子构建成表达盒。连同烟草叶绿体基因组同源片段rpl2-trnH-psbA和trnk-ORF509A以及选择标记基因aadA一起构建成烟草叶绿体表达载体。基因枪法转化叶绿体，壮观霉素筛选获得转化再生植株，经Southern、Western检测分析证明Bt基因已整合进入烟草叶绿体基因组并得到表达。有些转基因植株对3龄棉铃虫具有较强的毒杀作用，并能显著抑制昆虫蜕皮和生长发育。对高抗虫性植株子代进行的遗传学和分子生物学分析表明，Bt基因已稳定地遗传给子代叶绿体，且抗生素性遗传遵循非孟德尔的母系遗传规律。这是国内首次报道将Bt基因成功转入高等植物叶绿体并获得表达。