PAX6基因转录本在后发障形成中生物学功能的实验研究

白内障术后并发症- - 后发性白内障是导致视力再下降的最主要原因。病理显示白内障术后晶状体上皮细胞经历了由增殖到凋亡的过程。本研究通过制备后发障动物模型，测定其后囊膜上PAX6基因两个转录本的时空表达规律和α、β晶状体蛋白、α平滑肌肌动蛋白的变化，分析两个转录本对相关蛋白的影响和功能侧重，探索在后发障发生过程中PAX6基因两种转录本对晶状体蛋白的调控；进一步通过构建PAX6两个转录本的野生型表达载体和突变型表达载体，联合前期工作中已制备的能同时沉默PAX6二个转录本的PAX6-siRNA慢病毒干扰载体为工具；用RNA干扰的方法研究两个转录本对人晶状体上皮细胞的作用，观察晶状体B3细胞系的增殖、凋亡及克隆形成能力及其对α、β晶状体蛋白、α平滑肌肌动蛋白的调控，为探讨后发障发病机理并为其防治方法建立初步理论基础。为今后促进晶状体的再生提供一种思路。

白内障术后后囊膜浑浊是术后重要的并发症，我们通过建立大鼠后囊膜浑浊模型并测定Pax6转录本的表达变化。然后在HLE-B3细胞系通过敲减及回复表达Pax6转录本，观察其对B3细胞的影响。最后利用基因芯片技术进行全基因表达谱检测观察随着Pax6转录本表达变化对下游基因的影响。结果是.1. 成功复制了大鼠后发障模型，构建了大鼠Pax6基因的质粒并进行测序，获得大鼠Pax6两个转录本的序列。检测Pax6两个转录本的表达，在手术后7天，Pax6两种转录本的表达均有所增加，在术后14天时又有一定程度的回复，至28天时降至最低。两种转录本的表达趋势比较相似。.2. 成功构建了Pax6 shRNA重组慢病毒载体，抑制Pax6基因表达后，B3细胞凋亡的数目成倍增加。.3. 敲减Pax6基因的表达水平后，单独回复表达其中一个Pax6转录本，不但不能逆转敲减Pax6造成的细胞活力下降、增殖减缓，反而加重了这种变化。特别是回复表达转录本2，导致了更明显的细胞活力下降和增殖减缓，并且凋亡细胞数量也显著的增加。.4. 基因芯片的结果显示Pax6基因被敲减后，有224个基因表达被上调，144个基因表达被下调，Pax6两个转录本的回复表达，比Pax6的基因敲减，引起了更多与细胞周期和凋亡相关的基因表达的变化，包括WNT、p53信号通路的一些基因和Caspase相关的基因。