基于穴位敏化态探讨ATP和P2X3受体在穴位敏化过程中的作用及其机制

Acupoints sensitized state study is a hot issue of the acupuncture and meridian research. Acupoints sensitization has hyperalgesia, heat hyperalgesia and other types. Purine signaling molecules, ATP and P2X3 receptor, play an important role in the heat, pain transmission Therefore, it is believed that the changes of ATP concentration and P2X3 receptor in the sensitized acupoints may be the reasons of acupoints hyperalgesia, heat hyperalgesia. When disease happens to the viscera, the corresponding acupoints increase local ATP release to activate P2X3 receptors, which on one hand, passes pain information as neurotransmitters; on the other hand, causes localized changes of energy metabolism, through those two interactions acupoints hyperalgesia, heat signals are started by influencing the afferent nerve action potentials of the acupoints. .This study, using the different disease course of ISO-induced myocardial ischemia rats as a model, detects the ATP, ADP, AMP and adenosine concentration in the sensitized points using microdialysis, HPLC , and detects P2X3 receptor mRNA and protein expression in the sensitized points and myocardial tissue using q-PCR, western blotting , to analyse the dynamic relationship among the duration of the disease, ATP, P2X3 receptors and acupoints sensitized state, to study the function of ATP and P2X3 receptors in the acupoints sensitization, and to provide a scientific basis for exploring the meaning of acupoints sensitized state..

穴位敏化态研究是当前针灸经络研究中的热点问题。穴位敏化有痛敏、热敏等表现类型。嘌呤信号分子ATP及其P2X3受体在热痛等伤害性信息传递上具有重要作用，因此，我们认为穴位局部ATP及其P2X3受体的变化可能是穴位发生痛敏、热敏的原因。人体脏腑出现疾病时，相应穴位局部ATP释放增加并激活P2X3受体，一方面ATP作为神经递质传递痛觉信息，另一方面引起局部能量代谢变化，二者相互作用，可通过影响支配穴位的传入神经动作电位，从而启动穴位痛敏、热敏信号。.本研究以ISO诱导的不同病程的心肌缺血大鼠为模型，采用微透析、HPLC检测敏化穴位区ATP、ADP、AMP和腺苷浓度，采用q-PCR、蛋白印迹法检测敏化穴位区和心肌组织中P2X3受体mRNA及蛋白表达情况，分析病程与ATP、P2X3受体和穴位敏化状态三者之间的动态关系，研究ATP及P2X3受体在穴位敏化中的作用，为探讨穴位敏化态的内涵提供科学依据。

穴位本态研究是针灸学研究的核心问题之一。腧穴敏化不仅伴随病理产生，还可反映疾病病理的信息量。本课题观察不同剂量异丙肾上腺素对大鼠心电图影响，建立大鼠心肌缺血损伤模型，发现60mg/kg ISO 时大鼠呈可逆性心肌缺血，满足实验需求。采用伊文思蓝（EB）染色法，观察与心肌缺血相关的体表敏化穴位的动态分布，发现在造模后的当天，模型组的EB渗出点明显增多，这些反应点的分布与穴位分布呈现一定的相关性，分布位置主要位于：“脾、胃俞”(74.41%)、“心俞”（60.46%）、“肝俞”（46.51%）、“肾俞”（39.53%）；生理盐水对照组EB渗出点很少，大部分动物几乎不出现渗出。且EB渗出点的颜色深浅与病程有一定的关系，随着疾病的变化，EB渗出点颜色深浅出现动态变化，EB点颜色造模后的当天最深，后逐渐变浅，在造模后5天时完全消失，比心电图ST段增幅变化提前48h。研究心肌缺血损伤大鼠心肌P2X3受体mRNA及蛋白表达的变化，发现模型大鼠心肌组织P2X3 受体mRNA和蛋白表达明显升高，有统计学意义（P <0.05）。且在不同病程心肌缺血时，P2X3 受体mRNA受体表达与S-T段抬高幅度有对应变化趋势，随S-T段抬高幅度增大而增加，随S-T段抬高幅度减小而减少。研究心肌缺血损伤大鼠心俞穴P2X3受体mRNA及蛋白表达的变化，发现与生理盐水对照组比较，心肌缺血大鼠心俞穴P2X3 受体mRNA和蛋白表达明显升高，有统计学意义（P <0.05）。HPLC法测定急性心肌缺血大鼠心俞穴皮下微透析液中ATP等能量代谢物质的含量, 发现与生理盐水对照组比较，心俞穴处ATP含量增加。本课题初步证实ATP及P2X3受体参与了穴位敏化，为探讨穴位敏化态的内涵提供了科学依据。