枸杞多糖佐剂对“DC-Tfh细胞-B细胞”轴的免疫调节机制研究

Lycium barbarum polysaccharide (LBP) is able to regulate the immune system on different levels and play a distinct role as an immune adjuvant,but the function of the adjuvant is unknown. Preliminary in vivo experiments from our group have shown that LBP alone and when used as an adjuvant to the Foot and Mouth disease vaccine could induce the proliferation of follicular T helper(Tfh)cells. Based on these findings, we wish to demonstrate the mechanism by which LBP as an adjuvant enhances the adaptive immune response, with an emphasis on the dendritic cell (DC),Tfh and B cell axis. We will be using transmission electron microscopy, flow cytometry, confocal microscopy and RT-PCR techniques to determine how LBP stimulates the maturation of DC and induces Tfh activation and proliferation ex vivo and in vivo. We wish to further explore how LBP as an adjuvant enhances the foot and mouth disease recombinant adenovirus vaccine, therefore providing the theoretical basis for the development of LBP as a new vaccine adjuvant.

枸杞多糖（LBP）能在多条途径、多个层面对机体免疫系统发挥调节作用，具有显著的免疫佐剂作用，但其发挥佐剂活性的作用机制仍不明确，为此本课题组前期开展了相关试验研究，经小鼠体内试验发现LBP能诱导滤泡辅助性T细胞（Tfh细胞）的增殖，且能增强口蹄疫疫苗诱导Tfh细胞的增殖，在此基础上，本项目拟以贯穿于特异性免疫应答始终的主要免疫细胞，即树突状细胞（DC）、Tfh细胞、B细胞为切入点，探讨LBP在"DC-Tfh细胞-B细胞"轴中发挥的免疫调节作用及其佐剂作用机制。本研究拟采用透射电镜观察、激光共聚焦显微术、流式细胞术、Real-time RT-PCR等方法，通过体内外试验明确LBP对DC成熟及其诱导Tfh细胞增殖活化的免疫调节作用，阐明LBP对Tfh细胞辅助B细胞免疫应答的免疫调节作用。进一步探讨LBP疫苗佐剂增强口蹄疫重组腺病毒疫苗免疫应答的作用机理，为LBP开发为新型疫苗佐剂提供理论依据。

大量的研究证实枸杞多糖能在多条途径、多个层面上对免疫系统发挥调节作用，具有显著的免疫佐剂作用，但其发挥佐剂的机制尚不明确。新型疫苗较传统疫苗安全，但免疫原性弱，因此研制疫苗佐剂来增强免疫应答成为疫苗研究的一大方面。本课题前期开展了小鼠体内相关实验证实，LBP能够诱导口蹄疫重组腺病毒疫苗rAd5Vp1特异性Tfh细胞、B细胞的增殖。在此基础上，本课题拟以贯穿特异性体液免疫应答始终的主要免疫细胞，即树突状细胞(DC)、Tfh细胞及B细胞为切入点，探讨LBP通过对“DC-Tfh细胞-B细胞”轴的免疫调节发挥疫苗佐剂的机制。本课题通过体内小鼠实验和体外细胞共培养实验，采用流式细胞术、实时荧光定量PCR、ELISA以及免疫荧光/HE染色等技术，探索LBP在“DC-Tfh细胞-B细胞”轴中发挥的免疫调节作用。实验结果:小鼠实验证实高剂量(40mg/kg▪d)LBP能够作为rAd5VP1的疫苗佐剂，增强DC、Tfh细胞、B细胞的增殖分化与成熟，以及产生细胞因子的功能，能够促进生发中心的形成，增强Tfh细胞对B细胞的辅助作用，从而加强体液免疫应答，对“DC-Tfh细胞-B细胞”轴具有明显调节作用；细胞培养实验证实LBP高剂量刺激组(200μg/ml)能够作为免疫佐剂促进DC的成熟，加强DC与Tfh细胞的相互作用，从而增强Tfh细胞的功能，对“DC-Tfh细胞-B细胞”轴发挥免疫调节作用，进一步证实LBP疫苗佐剂增强口蹄疫重组腺病毒疫苗免疫应答的作用机理，为LBP开发为新型疫苗佐剂提供理论依据。