泛素介导鸡传染性支气管炎病毒主要抗原基因免疫应答机制的研究

泛素是普遍存在于真核细胞内的一种小分子多肽。研究表明，当将抗原基因与泛素融合表达时有利于抗原降解为8～10个氨基酸的小肽并通过MHC-Ⅰ类途径递呈。鸡传染性支气管炎（IB）是目前仍然严重危害我国养鸡业最重要的疫病之一，疫苗预防是目前防控该病最常用的措施，但流行毒株的抗原变异及血清型的多样性，导致现有疫苗免疫的效果不佳。课题通过DNA重组技术，构建由泛素介导的包含多个血清型IB病毒之主要抗原S1基因高变区抗原决定簇和N基因在内的多个不同组合DNA重组质粒，并对其进入鸡体内后所诱导的细胞免疫、体液免疫及其对不同血清型毒株的保护效果进行比较研究。旨在探索泛素介导的IBV多价DNA疫苗构建技术及其所诱导的免疫应答机制。为解决目前存在的传统疫苗研发周期长、难于包含足够多的血清型及诱导的免疫应答尤其是细胞免疫应答水平低等难题，以及高效安全的新型疫苗的研发提供理论基础和技术平台。

鸡传染性支气管炎（infectious bronchitis, IB）是由鸡传染性支气管炎病毒（infectious bronchitis virus, IBV）引起的一种急性、高度接触传染性的呼吸道疾病，在不同日龄、性别、品种鸡均易感，是目前仍然严重危害我国养鸡业最重要的疫病之一。疫苗预防是目前防控的最常用措施，但流行毒株抗原变异及血清型的多样性，导致现有疫苗免疫的效果不佳。DNA疫苗因其具有安全、研发周期短、多价组合、成本低等优势而越来越备受瞩目。它能够诱导机体产生细胞和体液免疫，但存在应答水平特别是细胞免疫应答方面不足等缺点。而泛素（ubiquitin, Ub）能够与蛋白质共价结合而被胞内的蛋白酶体识别并降解，有利于蛋白抗原的加工并通过MHC-Ⅰ类途径递呈，诱导机体产生更强的细胞免疫反应，增强疫苗的免疫效果。本课题利用这一原理，开展构建泛素介导的多个禽类病毒主要抗原基因的DNA重组疫苗平台及其免疫应答和机理的系统研究。为新型DNA疫苗的研发与应用探索新的途径。.本课题研究的基础是通过1985-2012年间广西IBV分子流行病学和血清学研究，确定了课题研究所用的IBV毒株及相关抗原基因。.研究完成了对泛素基因的扩增、改造和鉴定，以及完成了对包含泛素和IBV的N基因及S1基因高变区基因的重组质粒Ub-N，Ub-N-S1的构建和验证。通过DNA重组技术构建的由泛素介导的IB病毒主要抗原N基因和S1基因在内的多个不同组合DNA重组质粒，并对其免疫鸡后所诱导的细胞免疫、体液免疫及其对不同血清型毒株的攻毒保护效果进行比较研究，分别检测了疫苗所诱导的免疫应答水平以及宿主TH1/TH2类免疫应答相关因子的变化，首次从细胞水平、分子水平及抗体水平综合研究来阐明泛素、各个抗原基因及其不同组合在免疫中的应答水平及机制。研究结果达到课题的预期，令人满意。.在此成功平台的基础上，相继开展了针对传染性法氏囊病、禽白血病（J亚型）两个重要疫病病原主要抗原基因的重组DNA疫苗Ub-N-S1-VP2、Ub-gp85-P27-P10等的研究，试验结果进一步证明这一平台的有效性和可靠性。.这表明课题组成功建立了泛素介导的多个抗原基因重组DNA疫苗研发平台，为解决目前存在的传统疫苗研发周期长、单价以及难于包含足够多的血清型及诱导的免疫应答尤其是细胞免疫应答水平低等难题提供了理论基础和研发平台。