lncRNA Snora73b调控晶状体混浊的作用机制研究

The specific molecular mechanisms of development of cataract are still lack of comprehensive understanding. On the significance of the role of some new genes in the process to further reveal the molecular mechanism of the process cannot be ignored. Preliminary studies found the crybb2 knocked out mice appeared similar the senile cataract kind of lens opacity. We use gene chips, bioinformatics analysis and real-time quantitative PCR screening differentially lncRNA-Snora73b in lens tissue of crybb2 gene knockout and wild-type mice. Preliminary experiments found crybb2 through the mediated lncRNA-Snora73b affect the occurrence of lens opacity development, but its specific mechanism of action remains to be studied further. To this end, this study intends to use gene cloning, Western Blots、RNA-RIP and ChIP, combined with bioinformatics, cells in vitro, mouse model as experimental materials. Around interactions with crybb2 and Snora73b, and their influencing factors. In-depth to explore the interactions and mechanisms of Snora73b in the process of development of cataract, in order to explore new ways of effective prevention of cataract.

目前对白内障发生发展的具体分子机制仍缺乏全面了解，阐述某些新基因在该过程中所扮演的角色，对进一步揭示该过程的分子机制有着不可忽视的意义。前期研究发现，crybb2敲除小鼠早现类似老年性白内障样的晶状体混浊。我们使用基因芯片、生物信息学分析及实时定量PCR等方法筛选到了野生型和crybb2基因敲除小鼠晶状体组织中差异表达的lncRNA-Snora73b，并通过预实验发现crybb2有可能通过介导Snora73b影响晶状体混浊的发生、发展，但具体作用机制亟待进一步研究。为此，本课题拟运用基因克隆、Western Blots、RNA-RIP和ChIP等技术，结合生物信息学分析，利用体外培养细胞和基因敲除小鼠模型为实验材料，围绕crybb2与Snora73b的相互作用及上下游影响因素，多方面深入探讨Snora73b在白内障发生、发展过程中的作用机制，以期探讨有效预防白内障的新途径。

目前对白内障发生发展的具体分子机制仍缺乏全面了解，阐述某些新基因在该过程中所扮演的角色，对进一步揭示该过程的分子机制有着不可忽视的意义。前期研究发现，crybb2 敲除小鼠早现类似老年性白内障样的晶状体混浊。我们使用基因芯片、生物信息学分析及实时定量 PCR 等方法筛选到了野生型和 crybb2 基因敲除小鼠晶状体组织中差异表达的lncRNA-Snora73b，通过预实验发现 crybb2 有可能通过介导 Snora73b 影响晶状体混浊的发生、发展，但具体作用机制亟待进一步研究。本课题围绕 crybb2 与 Snora73b 的相互作用及上下游影响因素，多方面深入探讨 Snora73b在白内障发生、发展过程中的作用机制，以期探讨有效预防白内障的新途径。.Ca2+稳态对维持晶状体透明至关重要，钙离子激活了钙蛋白酶继而引起晶状体蛋白降解导致晶状体的混浊。本课题通过对比 crybb2 KO小鼠和WT小鼠的长链非编码RNA，找出了差异性lncRNA-Snora73b。根据基因芯片的结果，我们利用GSEA方法针对KEGG信号通路数据库中的数据进行分析，并通过验证发现Snora73b可能靶向钙离子通路上的CALML3基因调节crybb2的表达，促使晶状体发生浑浊。CALML3通过调节JNK1/2和ERK1/2通路参与细胞凋亡，其过表达能改变HLECs细胞中UVB诱导的氧化应激能力，抑制细胞凋亡。而KO小鼠中由于Snora73b的升高，导致CALML3表达量明显降低，促使胞内钙离子浓度增加，细胞凋亡，并产生大量活性氧，导致晶状体发生混浊。本研究将 lncRNA 调控 crybb2 表达作为切入点，初步阐明了 lncRNA-Snora73b 可能通过靶向钙离子通路上的CALML3基因调节crybb2的表达，促使晶状体发生浑浊的分子机制，为进一步深入了解白内障的发病机理提供了思路和方向。.