从周细胞死亡受体凋亡通路探讨加味补阳还五汤对早期糖尿病视网膜病变的作用机制

加味补阳还五汤（补阳还五汤+生地、玄参）是我科糖尿病视网膜病变临床防治中使用近10年的验方，前期临床研究证实该方对糖尿病视网膜病变具有良好的疗效，但具体机制不明。本课题拟在前期研究的基础上，针对糖尿病视网膜病变早期发病过程中视网膜毛细血管周细胞凋亡这一重要病理改变进行探讨。拟在动物模型+细胞培养实验的基础上，采用加味补阳还五汤对周细胞凋亡进行干预，通过TUNEL、流式细胞仪、免疫组化、Western blot、RT-PCR等方法观察周细胞凋亡及Fas/FasL、Bcl-2/Bax、Caspase-8、Caspase-3的表达，探讨加味补阳还五汤对周细胞死亡受体凋亡通路的调控，从分子信号传导和基因表达水平进一步深化研究加味补阳还五汤作用机制, 探讨该方对早期糖尿病视网膜病变的作用靶点。

背景：加味补阳还五汤（JBHD）是福建中医药大学附属人民医院眼科用于防治糖尿病视网膜病变（DR）的有效经验方。前期相关临床研究及基础研究均表明JBHD在防治早期DR上具有一定的功效，但是具体作用机制有待进一步明确。.目的与方法：通过整理DR相关中医文献，挖掘JBHD防治早期DR的中医内涵。针对糖尿病视网膜病变早期发病过程中视网膜毛细血管周细胞凋亡这一重要病理改变进行探讨，在细胞培养实验+动物模型实验的基础上，采用JBHD对周细胞凋亡进行干预，通过TUNEL、免疫组化、Western blot、RT-PCR 等方法观察周细胞凋亡及Fas/FasL、Bcl-2/Bax、Caspase-8、Caspase-3 的表达，探讨加味补阳还五汤对周细胞死亡受体凋亡通路的调控，从分子信号传导和基因表达水平进一步深化研究加味补阳还五汤作用机制, 探讨该方对早期糖尿病视网膜病变的作用靶点。.重要结果：初步整理提出了中医眼科清阳清窍相关学说理论，从眼的生理、病理及眼病的治疗三个方面阐述了清阳与眼的关系，丰富了对中医眼科清阳清窍相关学说的认识。细胞研究发现JBHD能够调控死亡受体通路Fas/FasL、Caspase-8等活性蛋白的表达及Bcl-2/Bax、Caspase-3的mRNA的表达，抑制Fas、FasL、Bax、Caspase-8、Caspase-3表达的上升及Bcl-2表达的下降，从而实现对高糖培养下原代大鼠RMPs的保护作用，抑制持续高糖诱导的RMPs的凋亡。动物研究亦证实JBHD能够调控死亡受体通路Fas/FasL、Bcl-2/Bax、Caspase-8、Caspase-3等活性蛋白的表达，抑制Fas、FasL、Bax、Caspase-8、Caspase-3表达的上升及Bcl-2表达的下降，从而实现对DM大鼠视网膜微血管网的保护作用,抑制DM大鼠视网膜微血管周细胞（RMPs）凋亡，延缓DM大鼠早期视网膜微血管损害的发展。.结论与科学意义：中医眼科清阳清窍学说可以用于指导DR辨证防治，JBHD能够基于死亡受体信号通路调控RMPs的凋亡抑制DM大鼠视网膜微血管损害，延缓DR的发生、发展。研究为加味补阳还五汤应用于早期糖尿病视网膜病变的临床防治提供了坚实的理论基础。