AUBP在小肠上皮应激中的作用及甘草的保护机制研究

小肠是消化吸收、分泌排泄和免疫防疫的重要器官，是多种疾病尤其是MODS的发生和转归中心。小肠上皮细胞在应激状态下，基因表达发生急剧变化，直接决定细胞的生存和死亡，但其调控机制仍不甚了解。文献和我们的前期研究提示，AU富集元件RNA结合蛋白（AUBP）TTP和HuR能通过对ARE-mRNA的转录后表达进行调节，从而对应激细胞有保护作用；本项目在原有基础上，建立小肠上皮细胞应激模型，观察TTP和HuR表达及转位,分析TTP, HuR与ARE-mRNA的相互作用，并过表达或沉默TTP，HuR, 观察ARE-mRNA的稳定性和蛋白翻译，通过研究TTP,HuR对含ARE-mRNA的细胞生存和死亡信号通路基因的转录后表达调控，阐明TTP, HuR在小肠上皮细胞应激的作用，分析防治小肠上皮应激的靶点。同时研究甘草及其有效成分对此途径的影响，发展中药对小肠上皮细胞应激的保护修复机制，为药物研制提供依据。

本项目研究按计划完成。主要研究（HuR、TTP）在小肠上皮应激状态下对细胞生存和死亡通路中含ARE-mRNA基因的转录后表达，分析其在小肠上皮应激的作用。同时研究甘草及其有效成分对此途径的影响，分析其保护和修复机制。. 项目建立了小肠上皮TNF-a应激和H2O2氧化应激模型，发现在TNF-a/CHX应激状态下，HuR向细胞浆内转位，HuR与p21、p53、XIAP mRNA的结合增多，p21、p53、XIAP mRNA稳定性相应增高。过表达HuR后细胞凋亡情况减轻，说明HuR能提高细胞抗凋亡能力。TTP同样向细胞浆内转位，TTP与内源性TNF-α、IL-6 mRNA结合增高，TNF-a的稳定性下降。提示TTP能促进TNF-a mRNA的降解，对细胞有保护作用。 在H2O2应激下，HuR向细胞浆内转位，与Gadd45α、p53的结合增多，Gadd45αmRNA稳定性增高。提示HuR可能能通过调控Gadd45a的转录后表达起抗氧化作用。TTP在H2O2应激未出现明显变化。. 在对甘草及有效成分研究发现：甘草酸作用48h后， HuR向细胞浆内转位，HuR与p21mRNA结合增高，p21mRNA的稳定性增高，蛋白表达增高，同时与procaspase3 的结合增高，细胞对TNF-a/CHX诱导凋亡的抵抗作用增强。沉默HuR后能逆转上述作用。表明甘草酸能促进HuR从细胞核向细胞浆内转位，通过与p21mRNA的结合使p21mRNA的稳定性增高，增高表达的p21与procaspase3结合，减少caspase3的生成，抑制凋亡，对细胞产生保护作用。发现甘草酸能增高p53和Gadd45α表达，对H2O2诱导的DNA损伤有保护作用。用甘草或芍药甘草汤对H2O2损伤细胞有保护作用，降低Caspase3和Bax表达，细胞凋亡减少，表明芍药甘草汤，白芍，甘草单独使用均有抗氧化作用。. 上述结果说明在TNF-a应激下，HuR和TTP能在转录后水平调控p21、p53、XIAP、TNF-a表达，对细胞产生保护作用，提示HuR和TTP可能作为TNF-a应激损伤的预防和治疗靶点。在H2O2应激下，HuR有保护作用。甘草酸能通过HuR介导的转录后表达调控增高p21的表达，p21通过与Procasepase3结合抑制TNF-a诱导的凋亡。甘草能保护细胞抵抗H2O2诱导的DNA损伤和凋亡。