DNQ通过lncRNA-RERT/c-FLIP抑制胃癌的分子调控机制研究

Yanbian is an area with high incidence of gastric cancer. It is reported that hypoxic tumor cells, which were not sensitive to radio- and chemo-therapy, are the main cause leading to treatment failure in gastric cancer. DNQ is a new chemotherapeutic drug of synthetic quinines, its effection dependent enzyme, NQO1 (NAD(P)H: quinone oxidoreductase). DNQ targets hypoxic tumor, and it can be extracted from marine bacteria and used as an effective inhibitor of many tumors. We previously found that NQO1 was highly expressed in gastric cancers; DNQ can significantly inhibit the proliferation of gastric cancers and upregulate hypoxic tumor related lncRNA-RERT. Meanwhile, lncRNA-RERT targets apoptotic suppressor gene c-FLIP by biological information retrieval, suggesting that the inhibition effect of DNQ on gastric cancer may be related to lncRNA-RERT/c-FLIP. In recent, it is found that long non-coding RNA (lncRNA) has biological functions, such as transcriptional regulation and so on, and its role in tumorigenesis is concerned. Thus, this project is designed to explore the regulating molecular mechanisms of lncRNA-RERT/c-FLIP in DNQ inhibition effects on gastric cancer, and to promote the application of DNQ in the target therapy of gastric cancer; meanwhile the value of lncRNA-RERT/c-FLIP and NQO1 as the prognostic markers of gastric cancer will be demonstrated via analyzing the clinical biological behaviors of gastric cancer. It will provide alternative medicine and new molecular targets to improve the therapeutic effects of gastric cancer.

延边地区是胃癌高发区。研究表明，胃癌中存在的低氧肿瘤细胞对放化疗等手段不敏感是导致治疗失败的重要原因。DNQ是针对低氧肿瘤新合成的醌类化疗药，其作用依赖NQO1，可从海洋细菌中大量提取获得，对多种肿瘤有明显抑制作用。我们前期发现：NQO1蛋白在胃癌中明显高表达；DNQ显著抑制胃癌细胞，且明显上调低氧相关lncRNA-RERT；生物信息检索发现RERT可以靶向凋亡抑制基因c-FLIP，提示DNQ抑制胃癌可能与lncRNA-RERT/c-FLIP相关。近年发现lncRNA具有转录调控等生物学功能，在肿瘤演进中的作用渐被关注。因此，本项目设计深入探讨DNQ通过lncRNA-RERT/c-FLIP抑制胃癌的作用及调控机制，推动DNQ在胃癌靶向治疗中的应用；通过综合分析胃癌临床生物学特点，明确lncRNA-RERT/c-FLIP和NQO1的胃癌标志物作用，为提高胃癌疗效提供新的备选药物及分子靶点。

本项目取得了以下方面的结果。1. 收集延边大学附属医院肿瘤科2008年1月—2013年12月间的108例胃癌腹膜转移患者为研究对象，分别于确诊时、每次化疗前检测血清CEA、CA125及CA72-4，分析单独、2或3种肿瘤标志物同时检测在胃癌腹膜转移的诊断敏感性，并分析其与临床病理因素、化疗疗效及生存期之间的相关性。结果表明，联合检测血清CEA、CA125和CA72-4可明显提高胃癌腹膜转移的诊断率。2. 选取延边大学附属医院2012年1月至 2014年2月收治的50例病灶＞5cm的原发性HCC患者，分成对照组( A 组) 和治疗组( B 组)，A 组采用单纯 S-TACE 治疗，B组采用S-TACE联合肝区高频深部热疗治疗。检测术前和术后不同时间段肝功能、sIL-2Ｒ、VEGF、IL-6、COX-2， 记录术后不良反应( 发热、恶心、呕吐、腹胀、疼痛等) 以及KPS评分，并随访生存期。结果表明，S-TACE 联合热疗可提高 HCC 患者 KPS 评分，降低不良反应，改善生存质量和延长生存期。血清 SIL-2Ｒ、VEGF、IL-6 及组织中COX-2变化可能与HCC患者的治疗效果相关。3.在Meta分析研究中一共纳入15个文献结果。发现lncRNA ATB高表达组与低表达组相比总生存期、无复发生存期、无病生存期、无进展生存期明显缩短。此外，lncRNA ATB高表达组倾向于低分化、临床分期较高、侵袭较深、早期发生转移、淋巴转移和血管侵袭。4.在人肝癌细胞株SMMC7721和HepG2中处理香叶醇和羽扇豆醇后发现其抑制了细胞的增殖；促进了细胞凋亡，增加了ROS的生成、BAX、Caspase-3、Caspase-8及Caspase-9mRNA的表达并减少了Bcl-2mRNA的表达。在SMMC7721细胞处理香叶醇和羽扇豆醇后减少了Bcl-2蛋白质的表达并增加了BAX、Caspase-3、Caspase-8及Caspase-9蛋白质的表达。在HepG2细胞处理香叶醇和羽扇豆醇后增加了P-p38及P-JNK蛋白质的表达的同时减少了P-ERK蛋白质的表达。5.脂多糖显著抑制了人牙龈细胞的增殖、促进了人牙龈细胞的凋亡，但黄芪甲苷计量依赖性的方式明显减弱了此变化。另外，脂多糖明显上调了P-p38、P-JNK、BAX及Caspase-3蛋白质的表达。