肿瘤激活的肝星状细胞诱导NK细胞失功能致肝癌免疫逃逸的研究

肝星状细胞（HSC）在同种异体肝移植实验中可以诱导免疫耐受。但是，肝癌微环境中HSC免疫功能尚不清楚。前期研究发现肝癌细胞激活的HSC表达特定分子表型，如高表达TGF-β。本课题我们提出肿瘤激活的HSC通过分泌TGF-β诱导NK细胞失功能促进肝癌免疫逃逸的假说。（1）应用消化酶、密度梯度离心法分离大鼠肝脏HSC，与大鼠肝癌细胞共培养激活后，收集其培养上清。应用磁珠分离大鼠NK细胞，加入HSC上清液刺激培养，检测NK细胞功能改变（受体表达、INF-γ分泌等）。加入TGF-β抗体后，观察其阻断作用。（2）大鼠肝癌细胞与HSC混合后种植到大鼠皮下，观察其成瘤情况；建立原位大鼠肝癌移植模型，用TGF-β抗体做干预治疗；在体内观察HSC与NK细胞相互作用。（3）应用临床肝癌切除标本，分离瘤内及癌旁HSC，检测TGF-β水平，与病人外周血分离NK细胞共培养，验证肝癌激活的HSC对NK细胞功能抑制作用。

本课题从免疫学角度探讨HSC促进肝癌免疫逃逸的关系。研究结果发现，（1）肝癌激活的HSC高分泌TGF-β1；肝癌激活HSC条件培养基（HSC-CM）明显抑制NK细胞对靶细胞杀伤，下调NK细胞INF-γ分泌；NK细胞刺激性受体NKG2D、CD69表达下调；NK细胞Jak/STAT3、PI3K/AKT和ERK磷酸化通路受到抑制。用TGF-β1抗体预处理HSC-CM，可以逆转其对NK细胞抑制作用。这些结果提示了肝癌激活HSC分泌TGF-β1，抑制NK细胞功能。（2）肝癌细胞与HSC混合种植到动物体内，肿瘤生长速度明显加快；给予TGF-β1抗体治疗后，治疗组肿瘤明显小于对照组；肝转移和肺转移亦减少；免疫组化染色，治疗组瘤内NK细胞数量增加，INF-γ、NKG2D表达增加。这些结果提示了阻断肝癌激活HSC分泌的TGF-β1作用，可以抑制肿瘤的生长和转移。本研究为干预HSC的免疫抑制功能治疗肝癌提供了新的方法。