孤儿核受体Nur77影响子宫内膜异位症胚胎植入的机制研究

子宫内膜异位症(EMT)是育龄妇女不孕的主要原因之一。已报道，转录因子HOXA10和FOXO1A是胚胎着床的关键分子，但对其调控机制不清。我们发现在胚胎种植窗口期，EMT 患者子宫内膜中转录因子Nur77和蛋白激酶MST1表达均明显下降；免疫共沉淀证实MST1与Nur77能相互结合，且MST1的氨基端催化结构域介导了Nur77与MST1间的相互作用与Nur77转录激活的调控。采用 CHIP-PCR结合基因芯片我们还发现Nur77直接结合于HOXA10与FOXO1A的启动子区。推测MST1与Nur77的相互作用调控HOXA10和FOXO1A影响着床。因此，本研究将首先确认Nur77参与HOXA10和FOXO1A调控的可靠证据；从蛋白质相互作用角度探讨MST1与Nur77相互作用调控HOXA10和FOXO1A的分子机制；进而评价其在导致子宫内膜异位症不孕患者胚胎植入障碍中的作用和临床意义。

子宫内膜容受性缺陷和子宫内膜蜕膜变不完全致使子宫内膜异位症与腺肌症不孕患者胚胎着床失败的重要原因，但机制不明。我们发现孤儿核受体Nur77在人胎盘早期蜕膜组织与小鼠胚胎围种植期子宫组织中的表达量均明显增加，且Nur77基因敲除小鼠生殖力下降；进一步研究发现Nur77直接与FOXO1A基因启动子区NBRE反应元件结合转录FOXO1A的表达参与调控人子宫内膜间质细胞蜕膜化标志蛋白dPRL 和IGFBP-1的表达及细胞骨架的重构。临床研究发现腺肌症不孕患者与他莫西芬诱导腺肌症小鼠的子宫内膜组织中Nur77和FOXO1A的表达较正常内膜中明显降低，且腺肌症不孕患者间质细胞分泌PRL和IGFBP-1的能力明显低于正常间质细胞，但当把患者间质细胞NR4A的表达量提高后，明显改善细胞PRL和IGFBP-1的分泌能力。这些研究结果阐明了腺肌症不孕患者胚胎种植失败的分子机制。.通过酵母双杂交筛选和免疫共沉淀实验证实MST1蛋白激酶结构域与Nur77的DNA结合功能域和LBD功能域直接结合，并明显促进Nur77对下游靶基因LIF的转录与STAT3的磷酸化；胚胎粘附实验证实MST1和Nur77均可以浓度依赖的方式显著促进BEWO细胞球与子宫内膜Ishikawa 的粘附，且MST1可协同Nur77促进BEWO细胞球与子宫内膜Ishikawa 间的粘附；当给予LIF抗体进行功能封闭后，MST1和Nur77促进BEWO细胞球与子宫内膜Ishikawa 间的粘附作用被明显削弱。这些结果初步阐明MST1磷酸化Nur77调节胚胎粘附的分子机制。.小鼠卵巢切除体外蜕膜化诱导模型研究表明小鼠子宫给予高表达Nur77 LBD/DBD腺病毒后，明显抑制蜕膜化的发生与胚胎的植入。免疫共沉淀分析亦发现Nur77 LBD/DBD介导了Nur77与FOXO1A和蛋白水解酶CAPN7的相互结合，并调节Nur77蛋白的稳定性与转录活性。转录因子KLF12直接给合于Nur77基因启动子区参与Nur77的转录调控。临床反复种植失败患者子宫内膜组织检测亦发现MST1、CAPN7、KLF12、FOXO1A与Nur77的表达异常。这些研究分子间的相互作用研究的深入将有望阐明临床反复种植失败病人胚胎种植失败的分子机制。