基于人核受体PPARγ亲合色谱的中药抗糖尿病药效组分筛选方法

中药成分复杂，药效物质基础不明确严重影响作用机制的深入探讨、中药新药创制和质量标准的提高。临床上有多种中成药用于糖尿病的治疗，但药效物质基础一直不明，作用机制不清楚。核受体PPARγ是配体依赖性转录因子，参与糖代谢反应调控，能被胰岛素增敏剂噻唑烷二酮类药物特异性激活，已经证明是II型糖尿病药物作用靶标。本研究以PPARγ核受体为药物作用靶标，克隆获得人核受体PPARγ，将其键合于载体上，制成核受体亲合固定相，构建核受体亲合色谱新方法；将该方法应用于目前治疗糖尿病的中成药和相关中药材抗糖尿病药效成分的筛选；运用表面等离子体共振光谱分析法和核磁共振分析法，进一步研究发现的药效组分与核受体PPARγ的相互作用。该研究有利于揭示中药抗糖尿病药效物质基础，可为糖尿病治疗中药质量控制指标的选择提供理论依据。

核受体PPARγ（peroxisome proliferator-activated receptor-γ）是配体依赖性转录因子，能被选择性配体所激活，参与调节糖脂代谢及胰岛素敏感，已经证明是Ⅱ型糖尿病药物作用靶标。从中药等天然产物中筛选PPARγ配体作为药物先导化合物是开发Ⅱ型糖尿病药物的重要途径。而传统的筛选方法基于系统分离结合药效实验，费时费力，不利于高通量筛选。本研究以PPARγ核受体为药物作用靶标，通过分子生物学技术将PPARγ的配体结合域LBD（ligand binding domain）与GST（glutathione S-transferase）融合表达，再将融合蛋白加载于预先装有谷胱甘肽琼脂糖的96孔筛板中，因为GST与谷胱甘肽有强力亲和作用，融合蛋白可以选择性、定向地固定于载体上，从而制成核受体亲合固定相，建立一种新型的高通量亲和色谱筛选方法。联用LC-MS、NMR等技术，可以快速从中药复杂样品中筛选PPARγ配体。将该方法应用于目前治疗糖尿病的中成药和相关中药材抗糖尿病药效成分的筛选。运用表面等离子体共振光谱分析法和核磁共振分析法，进一步研究发现的药效组分与核受体PPARγ的相互作用。该研究有利于揭示中药抗糖尿病药效物质基础，可为糖尿病治疗中药质量控制指标的选择提供理论依据。