let-7i调控RUNX3对肝癌干细胞干性维持的作用及机制研究

Maintenance of stemness in cancer stem cells (CSCs) is affected by microRNA. In precious research, let-7i increased in hepatic CSCs, and reduced the expression of RUNX3. RUNX3 could inhibit activity of β-catenin, which is connected with self-renewl, invasion and metastasis. So hypothesis is performed that let-7i may maintain the stemness of hepatic CSCs through suppressing RUNX3, modulating β-catenin and inducing self-renewl, invasion and metastasis. In this project, firstly the effect of let-7i on stemness maintenance is detected in hepatic CSCs. Secondly connection of let-7i and RUNX3 is observed in hepatic CSCs and hepatocellular carcinoma. The binding sequence of let-7i and RUNX3 is verified by 3’-UTR Luciferase report system. Thirdly the modulations of let-7i on Wnt/β-catenin and E-cadherin/β-catenin pathway are investigated, which is the mechanism of self-renewal, invasion and metastasis. Lastly the effect of drugs on let-7i/RUNX3/β-catenin is verified as therapy target. This research will help to reveal the new mechanism of stemness maintenance in hepatic CSCs, and supply the theoretic and experimental basis for the target therapy in hepatic CSCs.

microRNA对肿瘤干细胞干性维持起着重要作用。前期发现：肝癌干细胞中let-7i高表达，能抑制RUNX3的表达；而RUNX3能下调β-catenin的活性，从而影响自我更新、侵袭转移。提出假设：let-7i维持肝癌干细胞干性特性，是通过抑制RUNX3，激活β-catenin，促进自我更新和侵袭转移实现的。本项目设计如下：1、在肝癌干细胞中，观察let-7i变化对干性维持的影响；2、在肝癌干细胞和肝癌组织中，观察let-7i与RUNX3表达的相关性，运用3’-UTR荧光素酶报告系统，寻找两者的结合序列；3、研究let-7i调控Wnt/β-catenin、E-cadherin/β-catenin通路，进而影响自我更新、侵袭转移的机制；4、运用药物初步验证let-7i/RUNX3/β-catenin作为靶点的可能性。本研究将揭示肝癌干细胞干性维持的新机制，也为肝癌干细胞治疗提供有效的靶点。

项目背景：microRNA对肿瘤干细胞干性维持起着重要作用。前期发现：肝癌干细胞中let-7i高表达，能抑制RUNX3的表达；而RUNX3能下调β-catenin的活性，从而影响自我更新、侵袭转移。提出假设：let-7i维持肝癌干细胞干性特性，是通过抑制RUNX3，激活β-catenin，促进自我更新和侵袭转移实现的。.本项目主要研究内容如下：1、在肝癌干细胞中，观察let-7i变化对干性维持的影响；2、在肝癌干细胞和肝癌组织中，观察let-7i与RUNX3表达的相关性，运用3’-UTR荧光素酶报告系统，寻找两者的结合序列；3、研究let-7i调控Wnt/β-catenin、E-cadherin/β-catenin通路，进而影响自我更新、侵袭转移的机制；4、运用药物初步验证let-7i/RUNX3/β-catenin作为靶点的可能性。.重要结果和关键数据：1、CSCs在肿瘤发生、发展中起着重要的作用，但其干性维持的机制仍尚未明确。揭示肝癌干细胞干性维持机制，是本课题的核心，发现let-7i体内和体外对干性维持具有促进作用。2、揭示了let-7i通过RUNX3/β-catenin通路的调控自我更新，通过调控E-cadherin/β-catenin通路影响侵袭转移，并运用力达霉素和姜黄素初步验证let-7i/RUNX3/β-catenin作为靶点的可行性。3、let-7i能否通过RUNX3影响β-catenin活性，是本课题的关键，前期已发现let-7i能负向调节RUNX3，获得了let-7i与RUNX3 3’-UTR结合的序列为CTACCTC。4、揭示力达霉素、姜黄素抑制CSCs的新机制，初步验证let-7i/RUNX3/β-catenin作为靶点的可行性。.科学意义：1、首次揭示let-7i对肝癌干细胞干性维持的作用，首次阐明了let-7i与RUNX3 3’-UTR结合的序列；首次阐明let7i通过调控RUNX3影响β-catenin、E-cadherin/β-catenin通路，调节自我更新、侵袭转移的分子机制，将有利于发现新的干性维持的机制，为肝癌干细胞干预治疗提供新的靶点和思路。2、研究药物对let-7i/RUNX3/β-catenin通路的调控，有利于揭示药物抑制CSCs的新机制，更好的指导临床用药。本研究将揭示肝癌干细胞干性维持的新机制，也为肝癌干细胞治疗