鼻咽癌发病前后中医证型变化及DNA甲基化特征研究

在鼻咽癌高发区广东中山市，通过对鼻咽癌发病前后中医证型的调查，探索鼻咽癌发病前后中医证型变化规律，进而总结癌变过程的关键证型，为高危证型的鼻咽癌高危人群防护及鼻咽癌的中医治疗服务。选择典型的鼻咽癌发病前后病例，以目前高通量的DNA基因芯片技术探索癌变前后甲基化特征，分析致鼻咽癌变的关键甲基化基因，并以之作为靶基因以实时荧光定量PCR及RT-PCR技术进行验证。再扩大鼻咽癌标本量，以鼻咽炎为对照，以二维电泳技术研究特异性改变的甲基化基因所对应的蛋白质表达情况，验证和确认引起癌变的关键甲基化基因。本项目从微观（基因、分子）和宏观（证型）研究鼻咽癌变证型变化及甲基化特征，为鼻咽癌的一级预防服务。

结题中文摘要.1在全世界鼻咽最高发区广东中山市调查自然态鼻咽癌247例，显示鼻咽癌主要的体质类型是气虚质和平和质，少见失调寒质。随着鼻咽癌的进展，失调热质、湿质及瘀质逐渐增加。.2从古文献中进行调查，显示头颈恶性肿瘤患者的中医体质多为气郁质和气虚质。.3总结王士贞教授治疗鼻咽癌经验，重视患者体质，强调整体调治鼻咽癌；辨证治疗鼻咽癌放、化疗急性不良反应及鼻咽癌放疗后遗症；常选用岭南中草药治疗鼻咽癌。.4采用单细胞凝胶电泳实验技术研究鼻咽癌DNA损伤修复能力，显示鼻咽癌患者淋巴细胞的DNA损伤严重。且异常中医体质者DNA损伤高于正常中医体质者。.5选择癌鼻咽癌癌变前后对照病例为研究对象，染色质免疫共沉淀联合芯片技术检测全基因组DNA甲基化。结果：鼻咽癌癌变后CpG岛及启动子区基因发生明显甲基化。. 6，12例鼻咽癌10例鼻咽炎作为研究对象，实时荧光定量PCR分别检测5个基因，ADAM23、MIMT1、FAM150B、GRIN2A、LRRC4 5个基因在鼻咽癌患者中均呈现明显的甲基化，与鼻咽炎相比较，其差异具有非常显著性意义。.7 MIMT1、LRRC4、GRIN2A、FAM150B、ADAM23在鼻咽癌及鼻咽炎样本各50例进行免疫组化检查，显示此5个蛋白在鼻咽癌组织中很少表达，阳性率分别为18.4%、13.2%、23.7%、26.3%、47.4%，而在鼻咽炎组织中则明显表达，其阳性率分别为100%、83.9%、83.9%、90.3%、96.8%。.8应用免疫组化检测细胞周期蛋白CyclinDl和Cnllin-1蛋白在20例分化型鼻咽癌、20例未分化型鼻咽癌和20例鼻咽部癌前病变中的表达。结果： CyclinDl和Cullin-1在鼻咽癌中高表达。.9用Springbio高通量抗体芯片（美国）检测4个鼻咽癌及4个鼻咽炎标本，结果发现鼻咽癌表达上调2倍以上且有统计差异的蛋白有30余个，只有5个蛋白表达下调。.课题完成情况良好，研究成果正待申请专利及逐步以论文形式发表。