鼻咽原位癌中医体质及微小RNA表达调控研究

Nasopharyngeal carcinoma (NPC) in high incidence in zhongshan city, guangdong province, 50 cases of nasopharyngeal carcinoma in situ is chosen as the research object, 600 cases in check-up crowd as a negative control, to different disease stage (stage Ⅰ, Ⅱ period, Ⅲ and Ⅳ period) of all the 100 patients with nasopharyngeal carcinoma (NPC) as positive control, the use of traditional Chinese medicine physique survey scale physical investigation, and confirm the nasopharyngeal carcinoma in situ of TCM constitution type and its evolution regularity. Adopts world advanced Danish miRCURY ? LNA miRNA expression profile chip, for 10 cases of nasopharyngitis, study of nasopharyngeal carcinoma in situ expression of microRNA, screening of nasopharyngeal carcinoma in situ is obvious abnormal expression of microRNA, real-time fluorescent quantitative PCR test to confirm the specific expression, using bioinformatics software Targel Scan Release 4.0 database targeted point were analyzed, and the role of the predicted its regulation of genes and proteins, and using immunohistochemical techniques such as testing, verify the corresponding protein expression and confirm the miRNA regulation, for Chinese and western medicine to explore cause of nasopharyngeal carcinoma (NPC) services

在鼻咽癌高发区广东中山市，选择鼻咽原位癌50例作为研究对象，以体检人群600例作为阴性对照，以不同病期（Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期及Ⅳ期）的鼻咽癌患者各100例作为阳性对照，采用中医体质调查量表进行体质调查，探索鼻咽原位癌的中医体质类型及其演变规律。采用全球先进的丹麦miRCURY? LNA miRNA表达谱芯片，以鼻咽炎10例为对照，研究鼻咽原位癌miRNA表达情况，筛选鼻咽原位癌明显表达异常的miRNA，实时荧光定量PCR检测确认其特异表达，利用生物信息学软件Targel Scan Release 4.0数据库对其所作用的靶位点进行分析，预测其调控的基因和蛋白，并采用免疫组化等技术进行检测，验证相应蛋白的表达而确认miRNA的调控，为中西医探索鼻咽癌病因服务。

1.在鼻咽最高发区广东中山市调查自然态鼻咽癌247例中医体质，结果：鼻咽癌及原位癌中医体质类型主要为平和质（48.6%）和气虚质(36.0%)。.2.采用经络检测仪检测57例鼻咽癌ey 1126名岭南健康人群十二经脉。结果：鼻咽癌脾经、肾经虚证及肝经实证出现的比例明显高于健康人群。显示鼻咽癌经络特征表现为肝经的实证及脾经和肾经的虚证。岭南健康人群总体表现为经络虚证。.3.采用芯片技术检测17例鼻咽癌miR表达。结果显示miR在鼻咽癌组织中以上调表达为主，鼻咽癌存在着广泛而复杂的miR表达调控。.4.采用芯片技术、荧光定量PCR检测气虚鼻咽癌miR表达。结果：miR在气虚以上调表达为主，在鼻咽癌及气虚同时上调表达的且存在着统计学差异的miR有12个，主要包括miR-106-363基因族（miR-18b、miR-19a及miR-106）和miR-30基因族，在气虚和鼻咽癌均明显下调的且存在着统计学差异的miR有9个，PCR检测11个miR表达结果与芯片检测结果基本一致。结论：中医气虚存在着特定的miR表达特征且以上调表达为主，miR-106-363及miR-30两基因族可能是鼻咽癌气虚癌变的特征性miR。.5.通过脂质体转染将miR-150-5p及miR-34c-5p HNE1进行转染，采用PCR技术、流式细胞术及Transwell实验检测。结果：转染后的HNE1细胞凋亡率明显增加，HNE1细胞侵袭能力明显减弱，显示miR-150-5p及miR-34c-5p下调表达可能在鼻咽癌的发生和进展中发挥重要作用。.6采用Springbio蛋白芯片技术检测气虚质差异蛋白。结果：气虚质蛋白主要以下调表达为主，气虚质下调的蛋白主要包括角蛋白及细胞周期蛋白依赖激酶；CD115/CSF-1R和角蛋白既在气虚质及鼻咽癌均下调，结论：气虚质存在着特定的蛋白表达特征，表现为角蛋白及细胞周期蛋白依赖激酶的低表达，集落刺激因子1受体及角蛋白低表达为鼻咽癌气虚癌变特征蛋白。.7.调查2002～2013 年中山市东区中山籍鼻咽癌发病和死亡率,显示男、女性鼻咽癌粗发病率分别是44.66/105 和25.30/105，粗死亡率分别是17.21/105 和9.12/105。.8. 采用甲基化芯片及免疫组化研究FAM150B甲基化及其蛋白表达。结果显示在鼻咽癌为高甲基化,FAM150B蛋白在鼻咽癌为低表达