基于CXCL12/CXCR4信号轴淫羊藿苷通过miR-150-5P调控再生障碍性贫血骨髓MSC成脂分化的机制研究

Aplastic anemia (AA) is a group of refractory blood diseases characterized by multiple causes of bone marrow hematopoietic failure. Recent studies have found that icariin improves the bone marrow hematopoietic function of AA by inhibiting the adipogenic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells (MSC), but the mechanism is still unclear. Our previous study found that AA bone marrow MSC have strong adipogenic differentiation ability, and icariin can effectively activate CXCL12/CXCR4 signaling axis to inhibit the fat differentiation of bone marrow MSC. Based on the existing experiments, this study intends to use human bone marrow mesenchymal stem cells and mouse immune-mediated AA model to explore the improvement of bone marrow hematopoiesis by miR-150-5p regulation of adipocytokines based on CXCL12/CXCR4 signal axis icariin. The study of microenvironment and promoting hematopoiesis to effectively treat AA is of great significance for elucidating the molecular mechanism during the development of AA and providing new research targets, and provides an experimental basis for the clinical application of TCM in the future.

再生障碍性贫血（AA）是一组由多种病因导致骨髓造血功能衰竭为特征的难治性血液疾病。新近研究发现淫羊藿苷对AA通过抑制骨髓间充质干细胞成脂分化而改善骨髓造血功能作用，但其机制尚不清楚。我们前期研究发现AA骨髓间充质干细胞成脂分化能力强，淫羊藿苷可以有效激活CXCL12/CXCR4信号轴抑制骨髓MSC的脂肪分化。本课题故拟在已有实验基础上，拟用人骨髓间充质干细胞及小鼠免疫介导AA模型探索基于CXCL12/CXCR4信号轴淫羊藿苷通过miR-150-5p调控脂肪细胞因子改善骨髓造血微环境、促进造血从而有效治疗AA的研究，对阐明AA发生发展过程中的分子机制并提供新的研究靶点具有重要意义，为今后中医药临床的运用提供实验基础。

再生障碍性贫血（AA）是一组由多种病因导致骨髓造血功能衰竭为特征的难治性血液疾病。新近研究发现淫羊藿苷对AA通过抑制骨髓间充质干细胞成脂分化而改善骨髓造血功能作用，但其机制尚不清楚。我们前期研究发现AA骨髓间充质干细胞成脂分化能力强，淫羊藿苷可以有效激活CXCL12/CXCR4信号轴抑制骨髓MSC的脂肪分化。本课题故拟在已有实验基础上，拟用人骨髓间充质干细胞及小鼠免疫介导AA模型探索基于CXCL12/CXCR4信号轴淫羊藿苷通过miR-150-5p调控脂肪细胞因子改善骨髓造血微环境、促进造血从而有效治疗AA的研究，本课题选取本院10例符合AA患者及10例正常健康人骨髓标本， 体外对骨髓MSC进行分离、培养、鉴定。证实AA患者MSCs成脂分化强，淫羊藿苷可抑制AA患者成脂分化。体外研究实验证实miR-150-5p能促进再生障碍性贫血骨髓MSC成脂分化。研究已经发现CXCR4降低与MSC成脂能力显著相关，为了进一步明确两者的调控关系，我们通过在正常人MSC中加入CXCR拮抗剂观察其对油红O染色及成脂能力相关mRNA、蛋白表达的变化。AMD3100能加强油红O染色，增加脂肪沉积，促进再正常人骨髓MSC骨髓成脂肪分化，说明抑制CXCR4能促进正常人骨髓MSC的成脂分化。为了进一步明确淫羊藿苷对hMSCs成脂分化的具体分子机制，我们运用CCK-8法、western blot、免疫荧光、RT-PCR等检测miR-150-5p 、CXCR4及成脂分化相关mRNA和蛋白证实了淫羊藿苷是通过miR-150-5p激活CXCR4信号通路抑制AA患者MSC成脂分化。我们构建了骨髓MSC与HSC共培养体系：用 Transwell共培养技术培养骨髓间充质干细胞和造血干细胞。证实淫羊藿苷能显著增加AA患者造血功能。淫羊藿苷通过影响hMSC的成脂分化从而影响造血干细胞的造血功能。. 本项目从分子水平证CXCL12/CXCR4信号通路参与AA患者骨髓 MSC成脂分化，基本阐明淫羊藿苷改善骨髓造血微环境是通过miR-150-5p靶向调控CXCL12/CXCR4信号通路抑制骨髓MSC成脂分化，从而促进造血，并发挥对AA治疗作用。对阐明AA发生发展过程中的分子机制并提供新的研究靶点具有重要意义，为今后中医药临床的运用提供实验基础。