基于NLRP3炎症小体与SQSTM1/p62平衡探讨清热活血方药在RA治疗中的抗炎机制

Early rheumatoid arthritis (RA), the main symptoms are synovial hyperplasia and infiltration of inflammatory cells. Persistent inflammation may eventually lead to the destruction of the bone and cartilage. The macrophages play an important role in the inflammation of RA. It can be generated through the activation of NLRP3 inflammasome, releasing of inflammatory cytokine interleukin 1-β (IL-1β), and mediating inflammatory response further on the synovial fibroblasts. Macrophages can raise the expression of protein SQSTM1/p62, acting as a molecular brake in the NLRP3 inflammasome, inhibiting inflammation, avoiding the collateral damage. From hot-corrosion theory associated with inflammation, it confirmed that the treatment of activity RA by Qingre Huoxue Recipe, can effectively reduce the inflammation of affected joints, with the effect of delaying the process of destruction on the bone of RA patients. Basic research shows that the heat, dampness, and blood stasis invigorate the circulation of the formulas can effectively inhibit RA synovial inflammation.The study proposed by the animal model of RA, building the culture system of macrophages with synovial fibroblasts, from the inflammatory corpuscle NLRP3 ~ IL-1β shaft inflammation and controling the balance of protein p62, exploring the molecular mechanism of heat-clearing and invigorating the circulation of the inhibition of RA inflammation.

类风湿关节炎（RA）早期以滑膜增生和炎症细胞浸润为主要特征，持续的炎症反应最终可导致骨与软骨的破坏。巨噬细胞在RA炎症反应中起着重要作用，可通过激活NLRP3炎症小体生成，释放前炎症因子IL-1β，并进一步作用于滑膜成纤维细胞，介导炎症反应；巨噬细胞亦能上调SQSTM1/p62蛋白表达，充当炎症小体的分子刹车，抑制炎症反应，避免附带损伤。从与炎症相关的热毒蚀骨理论出发，采用清热活血方治疗活动期RA，能有效减轻受累关节炎症反应，起到延缓RA骨破坏进程的作用。基础研究表明，清热活血方药能调节RA细胞因子的分泌，抑制RA滑膜炎症反应。本研究拟通过RA动物模型，构建巨噬细胞与滑膜成纤维细胞共培养体系，从NLRP3炎症小体～IL-1β炎症轴与抑制蛋白SQSTM1/p62的平衡，探讨清热活血方抑制RA炎症反应的分子机制，进一步阐释清热活血方药在RA治疗中的抗炎护骨机制。

类风湿关节炎（RA）是国内最常见的高致残性慢性、炎症性自身免疫病，持续的炎症反应最终可导致骨与软骨的破坏。本相关通过观察清热活血方对RA大鼠模型一般形态学、病理改变的干预状况，并检测NLRP3炎症小体、SQSTM1/p62蛋白以及相关因子IL-1β和IL-18的表达的影响，探讨了清热活血方在RA大鼠治疗中的抗炎机制。本研究建立CIA大鼠动物模型，用清热活血方、金银花干预治疗，对比观察各组大鼠的整体状况、形态学变化情况及病理改变，通过分选、培养单核-巨噬细胞，建立巨噬细胞-滑膜成纤维细胞共培养体系；采用ELISA方法检测IL-1β和IL-18；采用RT-PCR检测大鼠滑膜组织、PBMC和体外培养细胞中NLRP3、SQSTM1/p62 mRNA表达水平；采用Western Blot方法对NLRP3、SQSTM1/p62蛋白表达水平对比分析。结果清热活血方能够改善CIA大鼠整体疾病状况，CIA大鼠关节的肿胀的情况得到有效地缓解；从病理上，清热活血方干预后，关节炎症水平和滑膜组织增殖得到有效控制，缓解了关节骨与软骨受损；细胞因子结果显示：与模型组大鼠相比，清热活血方组血清中IL-18和IL-1β含量均降低(P<0.01、P<0.05)；NLRP3 mRNA检测结果显示：滑膜组织和PBMC中，清热活血方组和金银花组与模型组大鼠相比较NLRP3mRNA表达水平均降低(P<0.05)；NLRP3蛋白检测结果显示：与模型组大鼠滑膜组织相比较，清热活血方组和金银花组NLRP3蛋白表达水平均降低(P<0.001)。与模型组大鼠PBMC相比较，清热活血方组NLRP3蛋白表达水平降低(P<0.05)。与模型组大鼠相比较，金银花组NLRP3蛋白表达水平降低，但无统计学意义(P>0.05)。各组间SQSTM1/p62mRNA表达、蛋白表达均未见明显差异。结论：1.CIA大鼠的NLRP3及其下游因子IL-1β和IL-18表达水平较高，提示NLRP3及其下游因子在RA的发生发展中起重要作用。2.清热活血方可抑制滑膜组织和PBMC中NLRP3表达，降低下游IL-1β和IL-18含量而发挥抗炎作用，NLRP3炎症小体有望成为RA治疗的新靶点。