基于MMP-2、CD44双重介导的miR-145靶向纳米复合物构建及抗乳腺癌转移作用的研究

乳腺癌转移严重威胁女性身体健康，miR-145能通过沉默MUC1基因、下调JAM-A、fascin的表达显著降低乳腺癌的转移和侵袭能力，但迄今缺乏合适的载体递送miRNA-145至转移性乳腺癌细胞。在前期研究工作基础上，我们预期构建一种基于MMP-2、CD44受体的二级靶向纳米复合物载体，达到靶向递送miR-145的目的。本课题以阳离子聚精氨酸（PLR）为载体，miR-145为模型药物，用MMP-2酶敏感的PEG化多肽修饰透明质酸(HA)作为靶向头基，转移性乳腺癌细胞高表达的CD44作为靶向位点，构建双重介导的靶向纳米复合物。研究该其对转移性乳腺癌细胞的靶向性、基因转染效率及调控作用，明确miR-145对于乳腺癌转移和侵袭相关基因的调控机制。通过本课题研究，将为基因靶向治疗转移性乳腺癌开辟新途径，为生物治疗药物的递药系统设计提供新的理论依据和方法，也为其他肿瘤的靶向治疗提供新的研究思路。

基因治疗的难点是研发高效安全的基因载体。本研究过交联技术制备新型非病毒基因递送系统。通过化学交联将低分子量载体相互连接，提高转染效率的同时降低了细胞毒性。我们设计了基于二硫键交联的嵌合多肽载体。将两端含有半胱氨酸的短肽在双氧水氧化下形成分子间二硫键，将短肽连接成高分子量的嵌合多肽载体。该嵌合多肽载体能够有效包载压缩质粒DNA，防止被酶降解。在肿瘤细胞内高还原性环境下迅速分解，促进质粒DNA的释放提高转染效率。在载体入胞效率的实验中发现交联之后的嵌合多肽载体入胞能力显著增强。我们测定了嵌合多肽载体的转染效率并明确各组分在转染过程中发挥的作用。将表达TRAIL的质粒作为模型药物，考察载药复合物对于Hela细胞的药效，并测定其对Hela细胞凋亡与周期的影响。体内实验中，我们考察了TRAIL/嵌合多肽载体复合物在裸鼠移植瘤模型中的转染效率，并且评价了TRAIL/嵌合多肽载体复合物对于Hela细胞移植瘤的生长抑制作用。