B细胞亚群差异活化诱导眼肌型重症肌无力进展的免疫机制研究

Ocular myasthenia gravis (oMG) and generalized myasthenia gravis (gMG) are one disease with different clinical manifestations and immunopathology. Most MG patients first have ocular symptoms and later develop gMG. The reasons behind the pathogenic mechanisms of progression of oMG to gMG are largely unknown. This project is based on our previous findings that oMG initiates predominantly as a result of B cell-mediated immunity to non-conformational AChR subunits. In this context, a large panel of B cell subpopulations and B cell-related immunological factors will be dynamically investigated in ocular versus generalized MG patients and EAMG mice to determine the internal relationship between the differences of pathogenic factors and the conversion from oMG to gMG. Meanwhile, we will confirm the immunologic characteristics and regulatory functions of B cell subpopulation and B cell-related factors in the progression of purely ocular muscle weakness into generalized MG by co-cultures and adoptive immunotherapy. We will explore whether different B cell activation profiles induced by the B cell-mediated immunity are in effect in progression from oMG to gMG. Results of our study are expected to shed new light on the pathogenesis of oMG progression. Our project will also aid in development of B cell-based marker for oMG and gMG, which will lead to both development of novel predictive biomarkers and innovation of treatment methods preventing conversion from ocular to generalized MG.

眼肌型重症肌无力(oMG)和全身型重症肌无力(gMG)是具有不同临床表现和免疫病理学的同一疾病。oMG常常早于gMG发生，但oMG进展为gMG的机制尚不明确。本项目立足于我们的前期发现“非天然构象H-AChR亚单位激活B细胞诱导oMG的发生”，系统地对B细胞亚群活化和相关免疫学因素在oMG和gMG患者、oEAMG和gEAMG小鼠中的差异进行比较，并动态观察这些差异与oMG进展的内在联系；同时通过体外共培养和过继疗法等明确各B细胞亚群和相关因子在oMG向gMG转变过程中的免疫调节机制，验证B细胞介导的免疫应答致B细胞亚群活化水平的差异可能参与诱导oMG进展为gMG，以期为进一步阐明oMG的发病和进展机制提供新的线索，同时早期发现并筛选oMG和gMG相关B细胞分子标志物，为探索一种新的以B细胞为基础的预测因子和治疗策略来阻止oMG进展提供理论支持。

眼肌型重症肌无力（ocular myasthenia gravis, oMG）起病隐匿、症状较轻，但可在短时间内向全身型MG（generalized MG, gMG）进展，其机制迄今未明。本项目在前期研究发现“非天然构象H-AChR亚单位激活B细胞诱导oMG的发生”基础上，为进一步探讨并分析非天然构象 AChR 亚单位诱导的 T、B 细胞介导为主的应答机制是否参与以及如何参与 oMG进展为gMG 的过程。我们收集并分析了oMG、gMG患者组与对照健康组外周血中T 、B淋巴细胞亚群及其细胞因子的相关免疫学指标，发现三组患者在CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞、调节性T细胞、调节性B细胞、记忆性B细胞、CD19+CD40+B细胞等T、B细胞亚群活化水平存在差异，进一步研究发现具有负向免疫调节功能的 Tregs 和 Bregs 比例减少，而记忆 B 细胞、CD3+CD4+T细胞等比例增加可能是oMG向gMG进展的重要原因；同时，我们还比较三组外周血中调节性T淋巴细胞及其功能亚群的比例和功能分析，提示Treg细胞及其亚群数量和功能变化导致的负向免疫调节功能受损可介导oMG的触发及其进展为gMG；另外，我们检测和比较oMG、gMG患者组与对照健康组外周血中T、B淋巴细胞相关细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、IFN-γ的浓度并初步探讨其在oMG致病的相关性，发现了IL-2、IL-6和IL-10细胞因子在oMG发生发展中扮演着重要的角色另一方面，我们利用重组人乙酰胆碱受体 (H-AChR) γ 亚单位免疫 HLA-DQ8 转基因小鼠建立的眼肌型实验性自身免疫性重症肌无力 (oEAMG) 模型，并通过该模型发现Th1细胞因子在oEAMG模型的建模过程中发挥重要作用。综上所述，本项目提出并验证了T、B 淋巴细胞亚群的差异性活化及其相关免疫学因素是 oMG触发及其进展gMG的重要环节，为后续研究奠定了基础。