基于阴中求阳理论探讨右归丸对糖尿病视网膜病变的VEGF-VEGFR促存活信号通路调控作用

Neovascular (NV) formation in proliferative diabetic retinopathy (PDR) resulted in repeated bleeding, exudation and proliferation， and is the main reason of blindness in patients with diabetes. Previous study found that Both Qi and Yin deficiency made up the DR basic pathogenesis, Yang deficiency could be the key pathogenesis in development of PDR and a major signaling pathway of NV formation of VEGF-VEGFR. Treatment direction should pay attention to benefiting Yang, but hot herbs using overmuch cause more bleeding, so we study on benefiting Yang based Yin and yang balance law, and explore the role and mechanism of Chinese medicine in inhibition PDR neovascularization. It is to explore the role and target of molecular mechanisms of Chinese medicine Yougui pill in treating with rats with PDR, in vitro and in vivo experiments. from VEGF-VEGF2 survival signaling pathway, built PDR rats models and high-sugar hypoxic cell model, using Western blot assay VEGF VEGF2, Akt of PI3K activity protein expression, RT-PCR assay of VEGFmRNA in VEGF2mRNA level, quantitative enzyme-linked immunosorbent law observed endothelial cell proliferation, migration tube formation, Fluorescein fundus angiography (FFA) dynamic observating rat retinal vascular leakage, NP, NV the morphology, and put forward a new ideas for Chinese medicine in treating with PDR .

增殖期糖尿病视网膜病变(PDR)新生血管（NV）形成，引起反复出血、渗出及增殖是糖尿病患者致盲的主要原因，前期研究发现气阴两虚为糖尿病视网膜病变(DR)基本病机，阳虚为PDR关键病机，由此我们推断阳虚可能与NV形成的VEGF-VEGFR信号系统密切相关，治疗除益气养阴外，应重视固护阳气，但温阳太过易燥伤络脉，则引起出血，因此本课题提出阴中求阳的温补思想，采用糖尿病大鼠模型及高糖缺氧细胞模型，从VEGF-VEGFR2促存活信号通路入手，应用Western blot、RT-PCR、酶联免疫法等检测VEGF 、VEGF2、Akt，PI3K、 VEGFmRNA、VEGF2mRNA水平，观察血管内皮细胞增殖、迁移、管型形成，眼底血管造影动态观察大鼠血管变化及NV形成，通过体内外实验，探索阴中求阳之右归丸抑制PDR新生血管化的作用靶点及分子机制，为PDR治疗提出新治疗思路，同时印证PDR阳虚病机。

背景：增殖期糖尿病视网膜病变(PDR)新生血管（NV）形成，引起反复出血、渗出及增殖是糖尿病患者致盲的主要原因。前期研究发现气阴两虚为DR基本病机，阳虚为PDR关键病机，由此我们推断阳虚可能与NV形成的VEGF-VEGFR信号系统密切相关，治疗除益气养阴外，应重视固护阳气，但温阳太过易燥伤络脉，则引起出血，因此本课题提出阴中求阳的温补思想,观察运用右归丸对糖尿病视网膜病变的VEGF、VEGFR-2促存活信号通路调控作用。内容：采用STZ腹腔注射SD大鼠建立糖尿病模型基础上，低剂量VEGF玻璃体注射造模PDR动物模型及高糖缺氧细胞模型，通过体内外实验，观察阴中求阳之右归丸对PDR阳虚关键病机的干预作用，对PDR大鼠的视网膜血管病变影响，应用眼底血管造影技术动态观察大鼠视网膜血管结构、荧光素渗漏、新生血管形成等；应用免疫组化方法、RT-PCR、Westernblot法检测PDR大鼠视网膜VEGF-VEGFR、PI3K/Akt等的表达，应用以上分子生物学技术方法观察视网膜血管内皮细胞增殖、移行及管型形成。结果及关键数据：1）与模型组相比较，右归丸中、高剂量组大鼠视网膜每层结构排列相对较规则，组织水肿情况也得到不同程度的减轻，毛细血管充血、扩张情况改善。2）与模型组比较，右归丸中、高剂量组VEGFmRNA、VEGFR-2mRNA以及VEGF、VEGFR-2蛋白在大鼠视网膜组织中表达均降低，差异有统计学意义(P﹤0.05)。3）与模型组比较，右归丸药物血清低、中、高剂量组均可降低高糖缺氧导致的大鼠视网膜微血管内皮细胞VEGFmRNA、VEGFR-2mRNA、PI3KmRNA、AktmRNA的高表达，各组间的差异均具有统计学意义(p<0.05)，高剂量组对基因高表达有明显的的抑制作用。右归丸药物血清中、高剂量组均可降低高糖缺氧引起的VEGF、VEGFR-2、PI3K、Akt的高表达，各组间的差异均具有统计学意义(p<0.05)。意义：基于“阴中求阳”立法之右归丸对DR发展探索阴中求阳之右归丸抑制PDR为PDR的气阴两虚至阴阳两虚的阳虚关键病机，以阴中求阳，温阳补肾，可能通过调控VEGF-VEGFR促存活信号通路，延缓了DR发展进程。新生血管化的作用靶点及分子机制，为PDR治疗提出新治疗思路，同时印证PDR阳虚病机。