难治性类风湿性关节炎多药耐药形成机制的研究及其多药耐药动物模型的建立

多药耐药（MDR）的形成是影响难治性类风湿关节炎(RRA)治疗效果的重要原因，但其形成机制不清。我们推测RRA中类肿瘤样增生的滑膜细胞存在像肿瘤细胞一样的多药耐药机制。我们的初步研究显示：RRA外周血细胞P-gp,BCRP和Survivin的表达明显高于RA和对照组。为寻求RRA多药耐药机制，本研究将在此基础上从分子水平，基因水平研究多药耐药基因（Mdr1）、多药耐药蛋白(P-gp、MRPs、 BCRP)、凋亡相关因子(NF-KB、 Survivin)及Pim-1原癌基因在RRA患者外周血和滑膜细胞中的表达，探讨和阐明MDR形成机制.并采用腺相关病毒转导MDR1基因至离体人滑膜细胞和大鼠关节腔，以期建造RRA滑膜细胞MDR株和大鼠多药耐药动物模型并分析耐药细胞株的蛋白质组学。为进一步研究多药耐药形成及逆转机制和逆转剂的研发提供作用靶点和实验基础，为提高RRA的治疗效果创造新的契机。

多药耐药（MDR）的形成是影响难治性类风湿关节炎（RRA）治疗效果的重要原因，但其形成机制不清。我们推测RRA中类肿瘤样增生的滑膜细胞存在像肿瘤细胞一样的多药耐药机制。我们的前期研究提示RRA外周血细胞P-gp的表达明显高于RA组和正常对照组。为寻求RRA多药耐药机制，本研究在此基础上从分子水平、基因水平研究多药耐药基因（MDR1）、多药耐药蛋白（P-gp、BCRP）、凋亡相关因子（Survivin、NF-κB）在RRA患者外周血中的表达，并利用Ad-EGFP-MDR1重组腺病毒转染技术构建多药耐药细胞模型和多药耐药动物模型。本研究发现多药耐药蛋白（P-gp、MRP） 在RRA患者外周血单个核细胞和滑膜细胞中表达增高，提示它们可能参与了RRA多药耐药的形成机制，而BCRP在RA治疗有效组和难治组间无差异，仅表现为RA各组BCRP mRNA水平明显高于正常对照组，提示其可能仅参与RA的免疫炎症过程，而与RA的耐药无关。此外，研究证实了MDR1及BCRP基因多态性参与RRA的多药耐药形成，其中MDR1 C3435C型可能与耐药相关，而MDR1 2677TT型及BCRP C421A型可能是多药耐药的保护性因素。接着研究发现RRA患者血清及外周血单个核细胞Survivin表达水平增高，提示Survivin与RRA多药耐药形成相关；而TNF-α与难治性类风湿关节炎（RRA）的多药耐药形成相关，并且通过NF-κB和JNK信号转导通路对RA外周血单个核细胞的表达和功能进行调控。为了进一步研究多药耐药中的机制，我们利用Ad-EGFP-MDR1重组腺病毒转染技术构建细胞模型和动物模型。在体外实验中证实了膜转运蛋白高表达是造成RA多药耐药的重要机制，并为今后深入研究RA多药耐药机制和寻求研发逆转剂提供了重要的实验手段和工具。此项研究对揭示RA多药耐药形成机制有重要意义，并为日后RA多药耐药逆转机制的研究和药物研发提供了新的理论基础和实验工具。