乙型肝炎病毒转录元件调控荧光素酶小鼠体内长期稳定表达体系的建立

由于缺乏理想的乙型肝炎病毒（HBV）感染小动物实验模型，机体内各种转录调节因素对HBV转录元件（增强子/启动子）活性的影响还缺乏深入了解。对此本研究拟构建含噬菌体整合酶识别位点的HBV增强子/启动子调控荧光素酶（Fluc）表达载体，通过水动力转染方法和噬菌体整合酶系统，建立一种新型HBV增强子/启动子调控Fluc在小鼠肝脏长期稳定表达小动物模型, 并结合活体荧光成像仪在体实时动态监测小鼠体内萤火虫荧光素酶的表达水平，为肝细胞特异性转录因子、细胞因子以及结合蛋白等因素在模型动物体内对HBV增强子/启动子活性调节作用的研究创造条件。也是探索一种以成年小鼠为基础的建立转基因动物模型新方法的过程。相信该模型的建立有助于转录调节蛋白与HBV增强子/启动子之间的结合和调节过程的深入研究，可进一步阐明HBV嗜肝特性的分子生物学机制。

基于水动力转染技术，建立了HBV启动子和增强子调控报告基因表达小鼠模型，结合活体荧光成像仪在体实时动态监测小鼠体内萤火虫荧光素酶的表达水平，在小鼠肝脏中评价HBV转录调控序列（4个启动子和2个增强子）的功能，为肝细胞特异性转录因子、细胞因子以及结合蛋白等因素在模型动物体内对HBV增强子/启动子活性调节作用的研究创造条件。也是探索一种以成年小鼠为基础的建立转基因动物模型新方法的过程。该模型的建立有助于转录调节蛋白与HBV增强子/启动子之间的结合和调节过程的深入研究，可进一步阐明HBV嗜肝特性的分子生物学机制。此外，我们还在不同组织来源细胞内，对乙肝的两个启动子C和X与两个增强子分别组合后介导报告基因的表达情况进行了比较，并且在小鼠肝脏内对其介导基因高水平稳定表达的情况进行了初步研究，我们发现启动子C和X分别与两个增强子组合后可以介导报告基因在小鼠肝脏内的长期高效表达，为它们在肝脏特异性基因治疗中的应用提供了基础。