鸭疫里默氏杆菌ompA蛋白功能的研究

鸭疫里默氏杆菌病是当前危害养鸭业最为严重的传染病之一，而目前有关鸭疫里默氏杆菌（RA）毒力基因及其致病机理等研究仍属空白。外膜蛋白直接参与细菌与宿主的相互作用，其中ompA在大肠杆菌等革兰氏阴性细菌更是一种重要的多功能蛋白,但RA与大肠杆菌等细菌的ompA同源性很低。在前期的研究中我们发现RA ompA在所有检测的菌株中均存在，且强弱菌株的ompA氨基酸序列和蛋白质分子量均存在较大的差异，推测ompA可能与鸭疫里默氏杆菌的毒力等有关。本研究将利用自杀质粒同源重组构建鸭疫里默氏杆菌ompA缺失突变株，并构建大肠杆菌－鸭疫里默氏杆菌穿梭载体以结合互补实验来研究ompA的生物学功能，主要包括：ompA缺失对其毒力、黏附与侵袭力的影响；ompA缺失对生物被膜形成能力的影响；评价ompA蛋白在抗RA感染免疫中的作用等。研究ompA的功能对于解析鸭疫里默氏杆菌的致病机制和新型疫苗的研制等有重要意义。

鸭疫里默氏杆菌感染是当前危害养鸭业的主要传染病之一。但人们对其毒力相关基因和分子致病机制还知之甚少。本研究在国内外率先建立了鸭疫里默氏杆菌的基因缺失突变与互补的研究平台，构建了鸭疫里默氏杆菌ompA基因的缺失突变株。研究结果表明：（1）与野生株Th4相比，缺失株Th4ΔompA的菌落、细菌形态和生长特性无明显差异；但对Vero细胞的粘附和入侵能力均显著性降低（p<0.01）；对雏鸭的致病性显著降低，且雏鸭接种后12h和24h两个时间点鸭血液中的细菌载量明显降低。以上试验首次证实了OmpA蛋白是鸭疫里默氏杆菌一种重要的毒力因子。（2）Th4ΔompA株及其亲本Th4株细菌免疫后的攻毒保护率无显著性差异，这提示虽然OmpA是鸭疫里默氏杆菌一种具有免疫原性的主要外膜蛋白，但它不是一种优势或主导性的保护性抗原。（3）结晶紫染色和Real-time PCR的试验结果表明，ompA基因缺失对鸭疫里默氏杆菌CH3株生物被膜的形成无明显的影响。（4）构建了鸭疫里默氏杆菌-大肠杆菌穿梭表达质粒pRES，该质粒可用于鸭疫里默氏杆菌基因缺失突变株的互补以及外源基因在鸭疫里默氏杆菌中的表达等。本研究的结果为进一步研究鸭疫里默氏杆菌的分子致病机制等奠定了基础。