hTERT转染雪旺细胞与复合FK506壳聚糖支架构建人工神经的研究

神经缺损临床上依靠自体神经移植解决，但自体神经移植存在供区损害和来源不足的问题，组织工程构建人工神经被认为最可能解决这一困境。人工神经构建的关键是种子细胞，雪旺细胞作为神经损伤后唯一可分裂、增殖、促进神经再生的非神经元细胞，在神经构建中具有重要的作用。但雪旺细胞是成熟的体细胞，作为种子细胞存在分泌能力不足及易于老化的问题，制约了人工神经的发展。本课题拟采用hTERT（人端粒酶逆转录酶）转染后获得"永生化"雪旺细胞，可持续传代并稳定地释放各种神经生长因子。hTERT转染不同于病毒、原癌基因转染获得的永生化，不会发生癌变的问题。另外为解决组织工程中异源性种子细胞被免疫排斥的问题，使用FK506壳聚糖鞘管作为支架材料，通过壳聚糖的局部缓释既营养保护种子细胞，又避免被排斥，发挥FK506具有的免疫抑制及神经营养的双重作用，以期解决人工神经规模化生产的难题，最大限度避免了全身用药产生的副作用。

修复周围神经缺损仍是外科领域的一个难题，目前主要的修复方法仍是通过自体神经移植，但是这种治疗方法本身存在一些不足。组织工程化人工神经为周围神经缺损修复提供了新的手段，随着组织工程材料研究的不断发展和对于组织工程神经认识的不断深入，使得组织工程化人工神经的发展成为一个非常有前景的领域。本研究采用hTERT（人端粒酶逆转录酶）转染雪旺细胞(SCs)，制备壳聚糖复合FK506仿生轴突导向神经鞘管材料，利用新型微流控芯片技术调整药物释放速度，确保鞘管微环境药物浓度达到最佳浓度，并将神经导管应用于周围神经损伤动物模型。结果发现：（1）hTERT可以成功转染SCs，hTERT基因的转入使SCs端粒酶活性被激活，其细胞寿命延长。而转染的SCs没有向恶性转化。为神经组织工程种子细胞的来源提供了一种途径。（2）利用微流控芯片技术成功构建了一种将三维培养、因子干预和生物力学刺激高度集成化的生物芯片，利用少量细胞对神经细胞外扩增环境进行高通量筛选，从根本上解决目前传统神经细胞培养方法无法实现的药物干预后的检测难题。首次证实了微流控芯片技术在神经组织工程领域应用的可行性。（3）壳聚糖支架材料利于SCs粘附和增殖，具有良好的细胞相容性和亲和性。FK506具有的免疫抑制及神经营养的双重作用，缓释FK506的壳聚糖鞘管既营养保护种子细胞，又避免被排斥，最大限度避免了全身用药产生的副作用。