神经干细胞与雪旺细胞复合构建人工神经修复大鼠喉返神经缺损的实验研究

组织工程化人工神经复合物中种子细胞的来源探索和体内移植后的功能恢复是喉返神经组织工程的一项重要研究内容。本课题拟采用PGLA高分子生物支架作为神经组织工程载体，神经干细胞和雪旺细胞作为种子细胞，构建组织工程化复合物，体外进行神经干细胞的定向诱导分化实验，研究其相关表面标志、蛋白和基因表达；体内进行人工神经复合物桥接修复鼠喉返神经损伤的功能实验研究。术后6周内，应用辣根过氧化物逆行标记、电生理学、神经干组织学、电镜观察以及组织工程学技术，评价导管内神经再生质量。同时运用活体MR示踪技术，研究神经干细胞在体内和体外定向分化为神经元的可行性和效率，探讨组织工程化复合物对喉返神经定向生长的作用，评价对神经感觉、运动功能的改善状况。该项目将为组织工程化人工神经种子细胞研究开辟新途径，为生物可降解材料的神经导管修复喉返神经缺损的临床应用研究奠定相应的实验基础。

长期以来，周围神经损伤一直是临床中比较棘手的问题，自体神经移植被认为是周围神经损伤修复的金标准，然而如移植物来源有限，捐赠部位功能缺失，运动感觉轴突错位生长，需要使用免疫抑制剂等副作用严重限制了其临床应用。目前，一些文献报道，将雪旺细胞和神经干细胞移植到神经导管中来修复受损的外周神经。然而其合理性及可应用性需要进一步的研究。我们的体外实验表明：内置纳米神经细丝的三维Laminin-chitosan-PLGA神经导管有利于神经细胞的迁移及再生，并且具有一定的机械强度和可塑性。在神经再生的过程中起支撑作用，再生后可以自我降解，比其他生物材料和人工合成材料更具有优势。我们研究的目的是评估雪旺细胞及神经干细胞共培养联合Laminin-chitosan-PLGA导管，利用显微外科技术来修复5mm长受损的喉返神经。分别于术后8周和12周进行功能和组织学方面的评估。结果显示雪旺细胞及神经干细胞共培养联合Laminin-chitosan-PLGA神经导管能促进神经再生。基于这些结果我们可以得出结论，神经干细胞及雪旺细胞联合Laminin-chitosan-PLGA神经导管是修复外周神经损伤理想的方法，且移植物中的细胞可以促进神经再生。