miR128调控MET信号机制及在逆转非小细胞肺癌EGFR-TKI耐药中的应用

应用表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）治疗晚期非小细胞肺癌（NSCLC）存在原发和继发耐药是其临床应用的瓶颈。课题组前期经实时细胞分析发现在MET高表达的EGFR-TKI非敏感细胞株A549转染miRNA-128（miR128）能明显提高其对吉非替尼的敏感性。本研究在细胞水平验证MET是否是miR128的靶基因，明确miR128是否直接作用于MET-3'UTR（非编码区），降解MET-mRNA，从而抑制MET表达，促进凋亡，抑制转移，逆转对EGFR-TKI耐药。在150例使用EGFR-TKI前的NSCLC标本及其中41例临床获益患者用药前/耐药后配对标本中，结合临床资料回顾分析，明确miR128与MET、与EGFR-TKI耐药及与预后的关联。该研究将阐明miR128调控MET信号机制，有望从miRNA水平进一步探求EGFR-TKI耐药机制，找出对抗方法，为克服耐药提供新靶点。

本研究课题目的是探讨某些特定miRNA是否通过调控MET 信号机制而逆转非小细胞肺癌（NSCLC)对表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）的继发耐药。在进一步针对NSCLC细胞实验过程中，我们发现miR-34a对MET的下调作用比miR-128更明显，我们的研究重点调整为miR-34a在其中的作用。MiR-34a作为一种抑癌基因，在NSCLC中呈低表达，我们发现，在NSCLC细胞中miR-34a的过表达可通过靶向作用MET-3‘-非编码区（UTR)，显著抑制MET的表达。HGF通过激活MET，进而通过旁路途径激活下游PI3K/Akt和ERK信号通路介导了EGFT-TKIs的继发耐药。HGF的过表达是EGFR-TKIs继发耐药的重要机制。我们选用PC-9和HCC827两种EGFR突变NSCLC细胞株，采用CCK-8法、流式凋亡技术、Western Blot法、双荧光素酶报告方法及体内裸鼠移植瘤等方法，我们发现miR-34a的过表达部分通过有效的抑制MET，进而在体外和体内水平均显著逆转EGFR突变NSCLC细胞对Gefitinib的继发耐药。该研究从miRNA 水平探讨了逆转EGFR-TKI 耐药的方法，为克服耐药提供了新靶点。