SILAC/AACT 技术研究KLK7调节前列腺癌上皮/间质细胞的蛋白表达谱

KLK7是一种编码人组织激肽释放酶7（hK7）的基因。前期利用共培养细胞模型发现，前列腺间质细胞通过旁分泌作用显著上调上皮细胞中KLK7的表达；组织芯片结合免疫组化的研究表明，hK7在晚期和低分化的前列腺癌组织中表达水平下调或缺失，但在高分化癌和PIN中的表达水平较高；稳定转染KLK7的前列腺癌细胞系DU145发生EMT。提示，KLK7在前列腺癌恶性进展中可能发挥重要的作用。本项目拟利用以质谱为基础的稳定同位素氨基酸定量标记技术（SILAC/AACT），定量分析KLK7在雄激素依赖/不依赖的前列腺癌细胞系22RV1/DU145中调节的蛋白表达谱以及通过癌细胞的旁分泌作用对间质细胞中蛋白表达谱的影响，为探讨KLK7在前列腺癌进展中的生物学功能及其作用机制提供蛋白分子基础。

KLK7是一种编码人组织激肽释放酶7（hK7）的基因，与PSA是同一家族。前期研究发现KLK7在前列腺癌恶性进展中可能发挥重要的作用。本项目利用以质谱为基础的稳定同位素氨基酸定量标记技术（SILAC/AACT），定量解析KLK7对前列腺癌细胞系22RV1/DU145蛋白表达谱以及通过癌细胞的旁分泌作用对间质细胞中蛋白表达谱的影响。经过三年工作，课题组构建稳定表达KLK7 前列腺癌上皮细胞株，利用稳定同位素标记及前列腺间质/上皮细胞共培养模型，结合SDS-PAGE-LC-MS/MS鉴定到了有/无hK7表达情况下，单独培养的前列腺癌细胞的差异表达蛋白665个；有/无hK7表达情况下,共培养体系中列腺癌细胞差异表达蛋白499个、前列腺间质细胞差异表达蛋白721个。此外，通过生物信息学综合分析hK7对前列腺癌细胞网络的调控（蛋白网络图、蛋白定位、蛋白修饰、蛋白功能等）。最后，利用Real-time PCR、Western blot、组织芯片对关键蛋白进行了验证。这些工作，为探讨KLK7在前列腺癌进展中的生物学功能及其作用机制提供了蛋白分子基础；同时，为深入了解前列腺疾病的病因及发病机制，从蛋白水平开发控制前列腺疾病的药物和方法，开辟新的治疗途径奠定基础。