基于MAPK途径的藏医赤巴型DM干眼病与藏药吉堪明目液干预研究

Dry eye syndrome (DES) is a high incidence complication of diabetes mellitus (DM), pathology of this condition is still not clear and currently there is no specific treatment. It is believed that the inflammatory reaction is an important factor and MAPK is a key signal molecule. In fact, this disease is well understood in Tibetan Medicine. Tibetan Medicine texts said that “Tripa makes eye sight function to see external things.” DM-DES eye disorder is related to the Tripa sight disorder. Tibetan medicine’s Kyer-kan eye drop has obvious efficacy as shown by clinical tests. Kyer-kan and other Tibetan medicinal herbs balances Tripa sight. This study will conducted to determine whether inhibiting the MAPK inflammatory signal pathway may be a mechanism by which the Kyer-kan eye drops are effective in the treatment of DM-DES. We will use a STZ rat model as a DM-DES model and will use benzalkonium chloride to make high-fat, high glucose rabbit model. The study will use high glucose to culture conjunctival goblet cells (RCj-GCs) model and to observe tear secretion, tear break-up time(BUT), proliferation of RCj-GCs and mucin secretion changes, the expression of RT-PCR and Western blot detection of MAPK, ERK, SAPK, NF- in lacrimal gland of NF kappa B, IL-1 beta, TGF- beta DM-DES inflammation signal. The study will also explore the mechanism of DM-DES prevention and control of Kyer-kan eye drops, to take advantage of the characteristics of Tibetan medicine prevention of DM.

干眼病（DES）是糖尿病（DM）高发的眼表并发症，其发病机制尚未阐明，目前缺乏特异性治疗方法，炎症反应是重要的影响因素，MAPK是关键的信号分子。DM是藏医优势病种，藏医认为“能视赤巴住眼能将诸物见”，DM-DES眼部不适与“能视赤巴”紊乱有关，前期临床研究表明藏药吉堪明目液用于DES疗效明显，小檗皮等药味具有平衡“能视赤巴”功能。本项目提出“抑制MAPK炎症信号途径可能是吉堪明目液治疗DM-DES的作用机制”，拟采用STZ大鼠、苯扎氯铵致粘蛋白缺乏型高糖高脂家兔、高糖培养结膜杯状细胞（RCj-GCs）等DM-DES模型，观察泪液分泌、泪膜破裂时间、RCj-GCs增殖活性及粘蛋白分泌变化，RT-PCR、Western免疫印迹等检测泪腺p38 MAPK、ERK、SAPK、NF-κB、IL-1β等DM-DES炎症信号表达，探索吉堪明目液防治DM-DES的作用机制，发挥藏医药防治DM的特色优势。

干眼病（DES）是糖尿病（DM）高发的眼表并发症，炎症反应是其重要的影响因素，MAPK是关键的信号分子。DM是藏医优势病种， DM-DES眼部不适与“能视赤巴”紊乱有关，前期临床研究表明藏药吉堪明目液用于DES疗效明显，小檗皮等药味具有平衡“能视赤巴”功能。本项目提出“抑制MAPK炎症信号途径可能是吉堪明目液治疗DM-DES的作用机制”，拟采用苯扎氯铵致粘蛋白缺乏型动物模型、和高糖培养结膜杯状细胞（RCj-GCs）DM-DES模型，观察泪液分泌、泪膜破裂时间、RCj-GCs增殖活性及粘蛋白分泌变化，RT-PCR、Western免疫印迹等检测泪腺p38 MAPK、ERK、SAPK、NF-κB、IL-1β等DM-DES炎症信号表达，探索吉堪明目液防治DM-DES的作用机制，发挥藏医药防治DM的特色优势。实际研究中，课题组通过吉堪明目液对高糖培养结膜杯状细胞（RCj-GCs）模型的影响和对苯扎氯铵诱导的db/db小鼠糖尿病干眼症（DM-DES）模型的影响研究，得出吉堪明目液能明显促进RCj-GCs增殖，其药效作用呈现出剂量依赖性，极高剂量促进RCj-GCs增殖的药效作用与阳性药左氧氟沙星滴眼液的药效相当。基于细胞实验的qPCR与WB实验结果高度一致，提示藏药吉堪明目液能显著降低上述目标基因和蛋白的表达，表明吉堪明目液能通过抑制炎症因子水平发挥抗炎作用，可减少炎症因子的释放，其作用机制可能同抑制MAPK信号通路有关，且药理作用呈现出明显的剂量依赖性。吉堪明目液对苯扎氯铵致db/db小鼠糖尿病干眼症模型的影响研究发现，吉堪明目液低、中、高剂量组泪液分泌量显著增加，其数据具有统计学意义（p <0.05），给予吉堪明目液7 d后，吉堪明目液低、中、高剂量组角膜荧光钠染色评分显著降低降低（p <0.05）。HE结果显示，空白对照组粘膜上皮细胞排列整齐；同时黏膜下组织排列整齐，结构致密，未见炎性细胞浸润。模型组粘膜层较厚，上皮细胞数量略有增加。此外，粘膜下细胞数量增多，排列不规则，粘膜下组织较宽，细胞核收缩，伴有一定程度的细胞坏死。上述模型组结膜上皮细胞的所有组织病理学变化在吉堪明目液治疗组中均明显改善。