基于Th17细胞及其相关因子的益气养阴清肝散结法治疗Graves病的机制研究

Graves' disease (GD)is a specific autoimmune disease,high morbidity and has no ideal therapy in recent years.There are relevant studies confirmed that Th17 cell and related cytokines have increased significantly in the GD serum, MAPK, NF-κB signal transduction pathways were activated by IL-17and IL-17R combined, to promote to secrete some cytokines such as IL-6, CXCL10 and ICAM-1 which played important roles in the pathogenesis of GD.The preliminary experimental results showed that Yiqiyangyin Qinggansanjie treatment can inhibit the GD goiter, reduce T3, T4 levels, increase TSH, reduce the expression of TRAb, TMAb and TGAb.The subject proposes to further explor the molecular mechanisms of its treatment of GD, integrated use of methods such as RT-PCR and WB, detect the content of IL-6, IL-17, IL-23, TGF-β and expression of IL-17, IL-17R on the GD model in vivo. In vitro study,　we will assay the changes of IL-6, CXCL10, ICAM-1 and other factors and the expression of MAPK, NF-κ B signal transduction pathways based on IL -17 effect.The all studies can completely explain the mechanism and therapeutic targets of the GD based on Yiqiyangyin Qinggansanjie treatment.

Graves病（GD）为特异性自身免疫病，发病率较高且无理想的治疗方法，研究证实Th17细胞和IL-17在GD血清中显著增高，IL-17与IL-17R结合后激活MAPK、NF-κB等信号通路，促进一些在GD发病中起作用的IL-6、CXCL10和ICAM-1等因子的分泌。本课题组前期实验研究表明，中医益气养阴清肝散结法能抑制GD甲状腺肿，降低T3、T4，升高TSH，降低TRAb、TMAb和TGAb的表达。本课题进一步深入研究其治疗GD的分子机制，综合运用RT-PCR 和WB等方法，在体实验检测GD模型中Th17细胞的相关因子IL-6、IL-17、IL-23、TGF-β水平及IL-17、IL-17R的表达，离体实验检测GD甲状腺细胞在IL-17作用下其IL-6、CXCL10和ICAM-1等因子的变化及MAPK、NF-κB等信号通路的表达，全面阐释益气养阴清肝散结法治疗GD的作用机制和治疗靶点。

本课题在前期研究的基础上，进一步深入研究益气养阴清肝散结方GD的分子机制，综合运用RT-PCR 和WB等方法，在体实验检测GD模型中Th17细胞的相关因子IL-6、IL-17、IL-23、TGF-β水平及IL-17、IL-17R的表达，离体实验检测GD甲状腺细胞在IL-17作用下其IL-6、CXCL10和ICAM-1等因子的变化及MAPK、NF-κB等信号通路的表达，以期比较全面的阐释益气养阴清肝散结法治疗GD的作用机制和治疗靶点。.本课题组按照项目任务书的计划要求，已完成全部实验工作计划，在国家核心期刊发表论文5篇，其中3篇已录用见刊，1篇SCI论文正在投稿过程中；获得国家技术发明专利１项（ZL201210460261.2）；培养毕业硕士研究生1名，另1名硕士研究生在读。.结题研究内容包括：.（一）完成了表达TSHR-A亚单位的腺病毒免疫BALB/c小鼠GD模型的建立及评价：通过检测造模后小鼠FT4和TRAb的变化及甲状腺组织病理改变，确定所造模型符合临床GD病的变化，可用于后续实验研究动物模型；.（二）完成了益气养阴清肝散结法对GD模型的Th17细胞相关因子的调控影响：通过各组小鼠的FT4、TRAb、IL-6、IL-17、IL-23、TGF-β水平及IL-17、IL-17R的表达的检测，表明益气养阴清肝散结方各剂量组对GD病TH17细胞的相关因子有调控影响；.（三）完成了益气养阴清肝散结法对IL-17作用的GD甲状腺细胞的调控影响：通过离体细胞水平的实验，检测GD甲状腺细胞在IL-17作用下其IL-6、CXCL10和ICAM-1等因子的变化及MAPK、NF-κB等信号通路的表达，表明益气养阴清肝散结可能是通过调控TH17细胞的相关信号通路起到治疗GD的作用。.通过此课题内容研究的结果表明，益气养阴清肝散结方对于GD病起到很好的治疗的作用，通过对IL-6、IL-17、IL-23、TGF-β水平及IL-17、IL-17R的表达的检测，及对IL-6、CXCL10和ICAM-1等因子的变化及MAPK、NF-κB等信号通路的表达，表明益气养阴清肝散结方对于GD的Th17细胞相关因子具有调控作用，并可能通过MAPK、NF-κB信号通路起到治疗GD的作用，本研究为GD的治疗提供了新策略，为研究和开发出疗效确切、作用机理和靶点明确的治疗GD的复方中药奠定了基础。