犬α干扰素高效表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

用碱变性大量提取含犬α-干扰素基因的质粒pAH4DNA，用PCR方法从质粒DNA中扩增出不含信号肽编码序列的犬α-干扰素成熟蛋白编码序列，在上游引物中加入起始密码子及EcoRⅠ酶解位点，下游引物中加入BamHⅠ酶解位点。将PCR产物连接到pGEM-T载体上，转化DH5α，并对克隆质粒DNA测序，结果表明成功构建了犬α-干扰素成熟蛋白编码序列的克隆。用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶酶解所构建的克隆载体DNA，用琼脂糖凝胶电泳回收试剂盒回收目的片段，将犬α-干扰素基因定向克隆到表达载体pBV220上，经酶解、PCR等方法鉴定，表明成功构建了犬α-干扰素成熟蛋白编码序列的原核表达载体。并初步建立了从工程菌中分离重组干扰素的方法，工程菌包涵体中犬α-干扰素达80%以上。