多基因表达载体的构建及其在抗肿瘤研究中的应用

应用脑炎，心肌炎（EMCV）和脊髓灰质炎病毒（Polio）中的内核糖体进入位点（IRES）构建了可同时表达多种目的的基因的多顺反子逆转录病毒载体，建立以GCEN为基本结构的载体系统。经包装细胞PA317包装可产生高滴度逆转录病毒。将重组逆转录病毒感染了小鼠肝癌细胞和人肝癌细胞。体外实验结果表明IRES上下游基因均获得有效表达，其中上游基因表达略高。动物实验结果表明多基因修饰的肿瘤细胞具有更好的抗肿瘤效应。如IL-2和TNFα双基因修饰的肿瘤细胞与单基因修饰的肿瘤细胞相比，致瘤性显著降低，免疫原性增强。具有很好的临床应用潜能。此外该多基因表达载体还能用于表达含多亚基的目的基因，并为开展联合基因治疗的研究提供了基础。