RhoA/Rho激酶通路对血管重塑中细胞外基质合成的调控机制研究

Vascular remodeling is the common pathophysiological foundation of many kinds of cardiovascular diseases. The interaction of vascular adventitial fibroblasts and extracellular matrix plays an important role in vascular remodeling. We previously showed that RhoA/Rho kinase pathway in vascular adventitial fibroblast was actived by angiotensin Ⅱ,and upregulation of fibronectin was induced. However, the regulatory mechanism remains unknown. This study was performed to investigate the role of matrix protein fibronectin in vascular remodeling which mediated by RhoA/Rho kinase pathway and downstream activator protein-1 (AP-1) based on the earlier reseach. Furthermore, the effects of fibronectin on the functions of adventitial fibroblast will be studied by co-culture fibronectin and adventitial fibroblast. The role of RhoA/Rho kinase pathway in vascular remodeling will be explored in detail.

血管重塑是多种心血管疾病发生发展的共同病理生理基础，血管外膜成纤维细胞与细胞外基质的相互作用在其中扮演着重要角色。前期研究我们发现血管紧张素Ⅱ激活血管外膜成纤维细胞中RhoA/Rho激酶通路，并诱导细胞外基质主要成分纤维连接蛋白表达，但其调节机制尚未明确。本课题将在前期研究基础上，进一步研究RhoA/Rho激酶通路及下游转录因子AP-1对血管外膜成纤维细胞合成 纤维连接蛋白的分子调控机制；并通过构建纤维连接蛋白与血管外膜成纤维细胞共培养模型，研究纤维连接蛋白对血管外膜成纤维细胞的功能影响，以及RhoA/Rho激酶通路对其作用的调控机制，深入探讨RhoA/Rho激酶通路激活在血管重塑中的病理意义。

血管重塑是多种心血管疾病发生发展的共同病理生理基础，血管外膜成纤维细胞与细胞外基质的相互作用在其中扮演着重要角色。前期研究发现血管紧张素Ⅱ激活血管外膜成纤维细胞中RhoA/Rho激酶通路，并诱导细胞外基质主要成分纤维连接蛋白表达。本课题进一步研究了RhoA/Rho激酶通路及下游转录因子AP-1对血管外膜成纤维细胞合成纤维连接蛋白的分子调控机制；并通过构建纤维连接蛋白与血管外膜成纤维细胞共培养模型，研究纤维连接蛋白对血管外膜成纤维细胞的功能影响，以及RhoA/Rho激酶通路对其作用的调控机制，深入探讨RhoA/Rho激酶通路激活在血管重塑中的病理意义。.本研究以适当浓度血管紧张素Ⅱ刺激血管外膜成纤维细胞，发现RhoA/Rho激酶通路明显激活，且下游转录因子AP-1磷酸化水平明显增高。进一步应用表达目的基因dominant negative N19RhoA的重组腺病毒Ad-CMV-N19RhoA-eGFP以及Rho激酶抑制剂 Y-27632作用于细胞，发现可抑制转录因子AP-1活性以及纤维连接蛋白mRNA及蛋白合成；另外，通过构建纤维连接蛋白与血管外膜成纤维细胞共培养模型，发现纤维连接蛋白可激活血管外膜成纤维细胞，促进其发生增殖、表型转化和迁移，而阻断RhoA/Rho激酶通路活性可抑制血管外膜成纤维细胞发生增殖、表型转化和迁移。.研究通过构建SD大鼠颈动脉球囊损伤模型，经颈动脉局部给予Ad-CMV-N19RhoA-eGFP，抑制RhoA/Rho激酶通路，发现可明显抑制血管外膜成纤维细胞激活及纤维连接蛋白生成，进而抑制血管损伤后新生内膜生成。体内外研究提示RhoA/Rho激酶通路激活在血管重塑中具有重要作用，其可通过调控下游转录因子AP-1影响血管外膜成纤维细胞激活，进而调节外膜成纤维细胞发生增殖、表型转化、迁移以及纤维连接蛋白合成，影响血管损伤后新生内膜的生成。.本研究项目以血管外膜成纤维细胞为切入点，从外界致病因子诱导细胞信号传导调控失调，引发细胞外基质蛋白纤维连接蛋白异常表达，阐述了RhoA/Rho激酶通路通过影响细胞外基质蛋白合成从而参与血管重塑的可能机制，本研究建立了血管外膜、细胞外基质和血管重塑间的崭新联系，开辟了研究血管重塑发生机制的新途径，进而为多种心血管疾病早期阶段干预信号转导和调控血管重塑相关靶基因的新药设计以及基因治疗方法的建立提供科学实验依据。