外周血游离DNA多基因SNPs联合检测对乳腺癌早期诊断价值的研究

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，早期诊断是提高治愈降低死亡率的最佳途径，寻求简单易行，高敏感的肿瘤标记物对防治乳腺癌具有重要的临床意义。肿瘤患者血液循环中游离DNA含量明显升高并可检测到肿瘤特异性基因改变。基因杂合性丧失(LOH)是乳腺癌最常见的肿瘤特异性基因改变，被广泛的用于抗癌基因的筛选。乳腺癌的基因丢失谱已被大量的研究绘制。探测血浆中肿瘤DNA特异性基因改变LOH用于乳腺癌的诊断的可行性很高。然而，由于非常微量的肿瘤DNA和低敏感性的检测方法使其难于用于临床实践。本研究试图通过以下策略来提高其对乳腺癌诊断的敏感性：1)设计多个基因标记物同时探测LOH的所有常见位点。2)用全基因扩增技术提高可获取的血浆中游离DNA；3)用更可靠的基因标记(SNP)，设计针对国人乳腺癌的分子探针。以期将探测血浆中肿瘤DNA特异性LOH更好地用于乳腺癌的早期诊断。

早期诊断是提高乳腺癌治愈率的关键。癌症患者血液游离DNA含量明显升高并可检测到肿瘤特异性基因改变。DNA甲基化是乳腺癌的早期事件，游离DNA甲基化检测可以提供一种无创的诊断方式。我们重点选择了在是乳腺癌癌变的发生、发展的起到重要作用的8个关键分子，并与乳腺癌的转移、复发、治疗和预后相关，研究基因甲基化对乳腺癌早期诊断的潜在价值。提取血浆DNA、修饰后进行巢式PCR后qMSP法检测各个基因的甲基化率，运用相关分析及Spearman秩相关分析发现，基因间的甲基化有相关性，提示在乳腺癌的发生、发展和/或转移中存在多基因甲基化；单因素分析基因甲基化情况与临床病理特征发现，RASSF1A、CDH13、HOXA5基因的甲基化与淋巴结转移相关，RASSF1A、SFRP2、FOXC1基因的甲基化与激素水平相关，P3H2基因的甲基化与HER2+相关，提示游离DNA基因甲基化具有监测乳腺癌转移、复发及疗效；Mann-Whitney U test 法进行比较两间甲基化率的差异，以SFRP2基因甲基化差异最显著（P=0.007），依次为RASSF1A（P=0.011），FOXC1（P=0.013），RUNX3（P=0.015），SYK（P=0.030），P3H2（P=0.054），CDH13（P=0.211），HOXA5（P=0.424），此提示游离DNA中基因甲基化可反应乳腺癌的生物学信息，是一种有前景的潜在的生物标记。