基于代谢组学方法研究云南白药对大鼠实验性关节炎作用及其机理

类风湿关节炎作为一种炎性骨病，与牙周炎骨吸收具有相似的病理破坏过程，二者均有免疫炎性反应导致骨的破坏，可能与机体对抗原的反应密切相关。云南白药在前期研究中发现有较好的抗炎，促骨修复作用，但作为多成分配伍中药，具体的机制及对病变机体代谢影响不完全清楚。目前研究表明，炎症因子（TNF-a）、NF-kB及OPG/RANKL在炎性骨破坏中起着关键作用，而这些因子又受基因及免疫调节的影响。故本项目采用胶原诱导关节炎模型，应用综合检测手段，对这些因子及参与免疫调节的CD4+CD25+T/CD4+CD25-T/TH17细胞检测，加以代谢组学绘制代谢物全谱分析图，比较各个实验组之间的变化，可望从血液、尿液中寻找一种特征性标志物，为临床早期诊断，病变程度及病变愈后的评估提供依据。进一步探讨云南白药抑制炎症，骨破坏及免疫调节方面的作用机制。

类风湿关节炎作为一种炎性骨病，与牙周炎骨吸收具有相似的病理破坏过程，二者均由免疫炎性反应导致骨的破坏。云南白药（YNB）在前期研究中发现有较好的抗炎，促骨修复作用，但作为多成分配伍中药，具体的机制及对病变机体代谢影响不完全清楚。本研究以代谢组学技术为主导联合多种技术，以炎症为主要的病理过程，对YNB的抗炎作用和机制进行研究，取得的主要结果及成果如下：.　　1. 应用GC-MS和LC-MS两种主流的色质联用技术，建立了适合YNB代谢指纹分析的样品预处理和检测方法，对不同批次的YNB进行了质量控制研究，为后续研究选择合适的药物提供了基础。. 2. 以类风湿关节炎大鼠作为炎症首要病理表现的疾病模型，发现YNB可以抑制炎症反应和骨关节破坏作用。血代谢组学分析显示YNB主要影响血中脂类成分变化，特别是可以使花生四烯酸回复到正常水平，细胞试验证实20 μg/mL YNB处理后可下调成骨细胞COX-1和COX-2的表达，表明YNB具有明显的抗炎作用。. 3.应用流式细胞技术对脾细胞检测发现YNB干预后CIA大鼠脾脏中CD4+CD25+Treg比例逐渐升高,在用药后第二周时该比例明显高于正常对照和关节炎组,而对CD4+CD25-细胞则无明显作用。与模型组（R组)相比，YNB组Th17细胞比例各个时间点均较模型组低；但Th17的含量仍高于正常组。. 4.应用RT-PCR技术对关节组织检测发现R组、YNB和甲氨蝶呤（M)组在第一周时RANKL的表达都明显高于正常组，而OPG明显比正常组低。YNB和M组随着给药时间的增加，RANKL的表达逐渐降低，OPG的比值逐渐增加，给药后的第二周RANKL的表达下降致正常组水平。关节免疫组化染色也显示YNB组RANKL阳性细胞的数量随着用药时间的延长逐渐降低。. 5.生化指标检测发现YNB可以下调血浆中促炎症因子PGE2、IL-1ß、IL-17水平，而上调抑炎因子IL-10的水平，并随着用药时间的延长作用越明显，表现为时间的依赖效应。. 6.本项目共培养两名硕士研究生，均已顺利毕业。已发表论文4篇，其中SCI1篇，核心期刊1篇，非核心期刊1篇，已录用待发表1篇。