miR-365/465在UVB致细胞周期阻滞时的调控作用及其与p53信号转导网络的关系

由于两极上空臭氧层空洞不可能在短期内得到修复，地球表面的生物在未来长达近百年里将有可能受到日益增加的紫外辐射的作用而造成对人类自身及其生存环境的不断危害。本项目拟以本课题组筛选出的对UVB辐射敏感的miR-365和miR-465为主要研究对象，分别在细胞水平(以慢病毒包装技术上调或下调其水平)和整体水平(裸鼠皮下成瘤)研究他们在UVB辐射诱导的细胞周期阻滞时的作用机制及其与p53信号转导网络的关系，主要包括：①.DNA损伤信号的蛋白激酶-p53/p21通路；②.对UVB辐射敏感的miR-365/465在实验条件下的变化规律以及其靶基因在RNA和蛋白水平的表达及其规律；③miR-365/465信号通路和p53信号转导网络的关系(调节作用及其机制)；④.红景天提取物DTs2002对于这些通路的调节作用。本项目对于深入研究紫外辐射的分子机制及其防护具有理论和实际意义。

由于两极上空臭氧层空洞不可能在短期内得到修复，地球表面的生物在未来的40-100年里将受到紫外辐射的持续作用并造成对人类自身及其生存环境的不断危害。本项目拟在首先筛选对UVB辐射敏感的miRNA基础上，分别在细胞水平和整体水平(裸鼠皮下成瘤)研究他们在UVB辐射诱导的细胞周期阻滞时的作用机制及其与p53信号转导网络的关系，其目的是明确UVB照射正常表皮细胞后miRNA的表达规律、筛选出的UVB辐射敏感miRNA在调控细胞周期中的作用及其与与p53信号传导网络的关系、UVB辐射敏感miRNA在皮肤癌中的表达及其作用机制等。同时也探讨红景天提取物DTs2002对于这些通路的调节作用。本研究发现，人表皮细胞HaCaT经UVB照射后以miR-365和miR-465最为敏感。其中miR-365在照后表达的升高最明显，而miR-465在照后所观察的时间内持续降低。经生物信息学分析和双光素报告基因实验证明，miR-365的下游靶基因为NF-IB且对CDK-6、p53和BCL-2的表达都具有明显的调控作用。miR-365对细胞的增殖具有明显的正调控作用且和皮肤鳞状细胞癌的侵袭正相关。UVB照射可能通过转录后调控作用提高细胞p53蛋白表达水平进而发挥其诱导细胞S期阻滞的作用；miR-365参与了p53诱导S期阻滞的过程。另外，红景天提取物DTs2002对于HaCaT细胞受UVB照后的存活率具有明显的保护作用。